第二章 生物反应动力学 1 酶促反应.ppt

第二章 生物反应动力学;第二章 生物反应动力学;?本章要求： 掌握简单酶催化反应动力学、有抑制的和复杂的酶催化反应动力学，掌握影响酶催化反应速率的因素，以及动力学参数的求取。 了解微生物反应过程的计量学，掌握分批培养时细胞生长动力学、底物消耗及产物生成动力学，学会细胞反应动力学参数的估算。;第一节 酶促反应动力学; 酶促反应是生物反应的基础，从酶促反应可获知： （1）酶催化反应机制； ?? （2）对酶促反应速率的规律进行定性或定量的描述，建立可靠的反应动力学方程，从而确定适宜的操作条件。;1.1.1 在生物反应器中使用的催化剂;1.1.2 酶的应用特点; 经典酶学研究中，酶活力的测定是在反应的初始短时间内进行的，并且酶浓度、底物浓度较低，且为水溶液，酶学研究的目的是探讨酶促反应的机制。 工业上，为保证酶促反应高效率完成，常需要使用高浓度的酶制剂和底物，且反应要持续较长时间，反应体系多为非均相体系，有时反应是在有机溶剂中进行。;1.1.3 酶促反应的特征;1.1.4 研究酶促反应的目的;??均相酶反应：系指酶与反应物系处于同一相—液相的酶催化反应，它不存在相间的物质传递。 ??非均相酶反应：系指酶与反应物系处于不同相的酶催化反应，反应过程存在相间的物质传递。;1.2.1 酶促反应动力学基础; 根据酶促反应速率与底物浓度之间关系，利用化学反应动力学方法建立相应动力学方程： ??零级反应 ??一级反应 ??二级反应 ??连锁的酶促反应;1.2.1 酶促反应动力学基础;1.2.1 酶促反应动力学基础;1.2.1 酶促反应动力学基础;1.2.1 酶促反应动力学基础;【例2-1】 卵状假单胞菌在分批式反应中先将葡萄糖转变为葡萄糖内脂，再转化为葡萄糖酸，此反应为一级反应，反应式如下：;解：;;1.2.2 简单的酶催化反应动力学;上述反应的速率可表示为： ; 由于中间复合物[ES]的浓度C[ES]为一难测定的未知量，因此不能用它来表示最终的速率方程。为此，需用反应体系中的可测量来代替该未知量。这样得到的反应速率方程可以用来描述反应的进程，知道随着反应的进行各组分浓度的变化情况，据此可以设计相关的反应器。; 对于上述反应，我们假设： （1）反应过程中，酶浓度保持恒定，即 （2）与底物浓度Cs相比，酶的浓度是很小的，因而可忽 略由于生成中间复合物[ES]而消耗的底物。 （3）产物的抑制作用可以忽略。 ;平衡假设：1913年， Michaelis-Menten认为酶催化反应历程中，生成产物一步的反应速率要慢于底物S和酶形成中间复合物的可逆反应速率，因此生成产物一步的反应速率决定整个酶催化反应的速率，生成复合物的可逆反应则达到平衡状态。;根据假设有： r=rp= k+2C[ES] 根据生成复合物的可逆反应有：;该方程中引入了两个参数： KS=k-1/k+1 ——解离常数 rP,max=k+2CE0 rP,max —— P的最大生成速率,mol/L.s ;1.2.2.2 Briggs-Haldane 方程 ;根据反应机理和拟稳态假设，有下述方程式：;该方程中引入了两个参数：;;在具体应用时，人们亦将B-H方程称为M-M方程。一律表示为: ;1.2.3 米氏方程动力学特征;Km和rmax的意义 ;Km和rmax的意义 ;[例2-2] 有一均相酶催化反应，Km值为2×10-3mol/L，当底物的初始浓度CS0为1×10-5mol/L时，若反应进行1min，则有2％的底物转化为产物。试求出： (1) 当反应进行3min，底物转化为产物的百分数是多少? 此时底物和产物的浓度分别是多少? (2) 当CS0为1×10-6mol/L时，也反应了3min，底物和产物的浓度又是多少? (3) 最大反应速率rmax值为多少?;解： (1) 根据题意，CS0＜0.01Km，此时一般认为可按一级反应处理。其动力学方程可表示为： ;【例2-3】某酶催化反应，其Km=0.01mol/l 。为了求其最大反应速率rmax值，现通过实验测得该反应进行到5min时，底物已转化了10%，已知CS0=3.4×10-4mol/l,并假定该反应可用M-M方程表示。试求： （1）最大反应速率rmax为多少？ （2）反应15min后，底物浓度为多少？ ;1.2.4 动力学常数的计算;将M-M方程取其倒 数得到下式：;以Cs/rs对Cs作图，得一斜率为1/rmax的直线，直线与纵轴交点 为Km/rmax,与横轴交点为-Km。;以rs对rs/Cs作图，得一斜率为-Km的直线，与纵轴交 点为rmax，与横轴交点rmax/Km。;1.2.4.4 积分法： ;【例2-4】在常