04碘淀粉比色法测定唾液淀粉酶.docVIP

碘-淀粉比色法测定唾液淀粉酶 一 实验目的 1、 掌握比色法测定a-淀粉酶的原理； 2、 掌握分光光度计的正确使用方法； 二 实验原理 1、比色法作为一种定量分析的方法，是以生成有色化合物的显色反应为基础，通过比较或测量有色物质溶液颜色深度来确定待测组分含量的方法。常用的比色法有两种：目视比色法和光电比色法，两种方法都是以朗伯-比尔定律 (A＝εbc)为基础。 2、血清中α-淀粉酶催化淀粉分子中α-1，4糖苷键水解，产生葡萄糖、麦芽糖及含有α-1，6糖苷键支链的糊精。 ａ-淀粉酶 淀粉 葡萄糖+麦芽糖+糊精 + 碘液 蓝色复合物 在底物过量的条件下，反应后加入碘液与未被水解的淀粉结合成蓝色复合物，其蓝色的深浅与未经酶促反应的空白管比较，从而推算出淀粉酶的含量。 3、酶活力的大小、即酶量的多少用酶活力单位（U）（active unit）表示。1961年国际生物化学学会酶学委员会提出采用统一的“国际单位”（IU）来表示酶的活力，规定为：在最适条件（25℃）下，每分钟内催化1微摩尔（μmol）底物转化为产物所需的酶量定为一个活力单位，即1IU = 1μmol /min。这样酶的含量就可用每克酶制剂或每毫升酶制剂含有多少酶活力单位来表示（U/g或U/ml）。 4、 计算公式： 其中，代表测定管淀粉的大致水解程度，大小范围为0～l。当