PCR技术试验设计.docVIP

PCR技术实验设计 【课题目标】 知识与技能 1、了解PCR技术的基本操作 2、理解PCR的原理 3、讨论PCR的应用 过程与方法 　　在多聚酶链式反应扩增DNA片段的实验过程中，应避免外源DNA污染，严格控制温度等反应条件 情感、态度与价值观 通过对PCR实验的操作及结果分析，培养学生严谨的科学态度和实事求是的科研精神 【课题重点】 PCR的原理和PCR的基本操作 【课题难点】 　PCR的原理 【实验设计】 实验流程： 多聚酶链式反应扩增DNA片段 PCR原理 DNA的复制需要酶、原料、能量、引物 DNA的变性和复性受温度影响 PCR过程 变性 复性 延伸 操作步骤 配制PCR反应体系 移入离心管 放入PCR 设置工作参数 DNA扩增 测定含量 稀释 调零 测定并读数 计算 仪器设备： 1、PCR仪2、微量离心管3、微量移液器 PCR反应体系： 缓冲液、DNA模板，四种脱氧核苷酸原料、热稳定DNA聚合酶、两种RNA引物，水 【操作步骤】 1．准备： 按照PCR反应体系配方配制反应液； 2．移液混合： 将PCR反应体系50μL用微量移液器转移到微量离心管（0.5mL）中； 3．离心： 将微量离心管放到PCR仪中； 4．设置PCR仪： 设置PCR仪的工作参数； 5．反应： DNA在PCR仪中大量扩增； 6．水浴加热： 将微型离心管依次在95℃、55℃、72℃的恒温水浴锅中