第3章物理图谱的绘制探析.pptVIP

第三章 物理图谱; 遗传图的局限性 遗传图的分辨率有限 大基因组的人类及多数高等真核生物不能获得大量的子代 遗传图精确度有限 ;;;;;;只能应用于较小的分子 通常识别6bp的限制酶适合50kb以下DNA分子的精细作图 大于50kb基因组可采用稀有切点限制酶进行限制性作图 ;稀有切点的酶分为两类： i. 识别具有7或8个核苷酸序列的酶 如SapI(5-GCTCTTC-3),SgfI(5-GCGATCGC-3) ii.识别序列所含基序在靶DNA中稀少的酶 人类基因组中CG序列很稀少，因此含有此序列的限制酶切点很稀少，例SmalI(5-CCCGGG-3),产生78kb片段，NotI(5-GCGGCCGC-3),1Mb ;;;;DNA分子限制性位点的直接检测-光学作图 光学作图：直接在显微镜下观察检测限制性酶切位点 凝胶拉伸：将染色体DNA悬浮于融化的琼脂糖中，然后滴加到用限制酶包被的显微载波片上，当凝胶冷却时DNA分子呈伸展状态。然后用加入氯化镁激活限制酶，切割DNA分子，同时加入荧光染料使DNA分子染色，延伸的分子中的限制性酶切位点就逐渐形成缺口，可用高分辨率的荧光显微镜检测到 分子梳理：将硅胶树脂包被的盖玻片浸入DNA溶液中，保留5分钟，使DNA分子的末端黏附于盖玻片上，然后以0.3mm/s的速度移动玻片，使DNA分子整齐排列在盖玻片表面