2发酵工业菌种制备原理和技术.pptVIP

第二章;本章内容 ;微生物工程工业生产水平 的三个决定要素: ;一．工业常用微生物;最常用的工业微生物;最常用的工业微生物;最常用的工业微生物;最常用的工业微生物;微生物工业对菌种的要求;微生物菌种保藏机构名称和缩写 ; 国外重要菌种保藏机构 1、ATCC：美国模式培养物（菌）保藏中心 2、NRRL：美国农业部北方开发利用研究部 3、CSH：美国冷泉港研究所 4、IAM：日本东京大学应用微生物研究所 5、IFO：日本发酵研究所（大阪） 6、NCTC：英国国立标准菌种收藏所 7、CBS：荷兰真菌中心保藏所;菌种扩大培养的目的： 为每次发酵罐的投料提供相当数量的代谢旺盛的种子。 ;种子扩大培养定义;种子制备的过程大致可分为： 实验室种子制备阶段 生产车间种子制备阶段;实验室种子的制备一般采用两种方式 固体培养基培养孢子 液体培养法;（1）种子罐的作用： 主要是使孢子发芽，生长繁殖成菌（丝）体，接入发酵罐能迅速生长，达到一定的菌体量，以利于产物的合成。 ;（2）种子罐接种： 微孔接种法 火焰保护法 压差法 ;（3）种子罐级数的确定 种子罐级数：是指制备种子需逐级扩大培养的次数，取决于： 菌种生长特性、孢子发芽及菌体繁殖速度； 所采用发酵罐的容积 ;细菌：生长快，种子用量比例少，级数也较少，二级发酵。 茄子瓶→种子罐→发酵罐 霉菌：生长较慢，如青霉菌，三级发酵 孢子悬浮液→一级种子罐（27?C,40小时孢子发芽，产生菌丝 ）→二级种子罐（ 27?C,10~24小时，菌体迅速繁殖，粗壮菌丝体）→发酵罐 放线菌：生长更慢，采用四级发酵 酵母：比细菌慢，比霉菌，放线菌快，通常用一级种子 ;;确定种子罐级数需注意的问题;（4）种龄;（5）接种量 接种量的大小决定于生产菌种在发酵罐中生长繁殖的速度。 通常接种量，细菌1~5%，酵母菌5~10%，霉菌7~15%、有时20~25%。 ;3、发酵工业种子培养; 浅盘固体培养 深层固体培养 ;优点： （1）酶活力高。 （2）生产过程中无菌程度要求不很严格。 （3）对于固体发酵，由于产物浓度大，易于分离，可以有效的降低产品分离成本。 缺点： （1）生产劳动强度较大，占地面积大，不宜自动化生产。 （2）周期长。 （3）培养过程中环境条件控制较难。 （4）生产过程中，由于无菌程度较低，其菌种不纯。; ;优点： （1）生产效率高，便于自动化管理。 （2）生产过程中温度、溶氧、pH值等参数可以实现全面控制。 （3）通常生产液体种子，整个生产周期较短。 缺点： （1）无菌程度要求高，相对生产设备投资较大。 （2）对于某些种类的发酵，液体培养因投资大、生产密度大而难以实现。 ;几种深层培养法 ; 分批培养： 是指在一个密闭系统内，投入有限数 量的营养物质后接入少量微生物菌种 进行培养，使微生物生长繁殖，在特 定条件下只完成一个生长周期的微生 物培养方法。;连续培养： 是指以一定的速度向培养系统内添加新鲜培养基，同 时又以相同的速度流出培养液，从而使培养系统内培 养液的量维持恒定，微生物细胞能在近似恒定状态下 生长的发酵方式。;补料分批培养： 是指在分批培养过程中，间歇或连续地补 加新鲜培养基的培养方法。;4、种子质量的控制措施;影响种子质量 的因素; 主要是碳源、氮源、无机盐、生长素和水等。 糖份少而氮源多些(菌体增殖为主要目的) 。 与发酵培养基的主要成分相近; ; 温度过低，菌种生长发育缓慢 温度过高会使菌丝过早自溶 湿度低，孢子生长快； 湿度大，孢子生长慢 ; 选择最适种子培养pH的原则是获得最大比生长速率和适当的菌量 培养最后一级种子的培养基的pH应接近于发酵培养基的pH，以便种子能尽快适应新的环境 ; 溶解氧的作用：参与菌体呼吸作用 搅拌：促进氧的溶解与营养物质及代谢产物的分散。 通气量的多少以溶解氧的多少来衡定（溶解氧浓度应不低于临界溶氧浓度）。 通气过程中，影响溶解氧的因素：菌种（丝状影响最大）；培养基性质；培养阶段；发酵罐的结构； ; 危害：影响微生物对氧的吸收；妨碍CO2的排除；减少设备利用率（有效容积减少）；造成跑料，导致染菌； 消泡方法： （1） 消泡剂：天然动植物油、石油化工矿物油；改性油，表面活性剂（有机硅聚合物）； （2） 机械消泡： （3）改变培养基成分：; 染菌原因：设备、管道、阀门漏损、发酵罐结构“死角”、灭菌不彻底、空气净化不好、无菌操作不严、菌种不纯；; 种子罐级数越少，越有利于简化工艺，便于控制，减少染菌； 种子罐级数取决于： ①种子的性质（生长繁殖性能）； ②孢子瓶中孢子的密度（密度大则级数少）；