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- 2016-07-29 发布于湖北
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第四章 分子基本操作技术;核酸包括DNA、RNA两种分子,在细胞中都是以与蛋白质结合的方式存在的
真核生物95%的DNA存在于细胞核内,5%的DNA在细胞器
75%的RNA存在于细胞质,10%在核内,15%在细胞器
其中rRNA(80~85%)
tRNA及核内小分子RNA(10~15%)
mRNA(1~5%);第一节 DNA的基本操作技术;DNA提取的几种方法
1、染色体DNA的提取
CTAB法
SDS法
其它
2、非染色体DNA的提取
质粒DNA的提取,包括碱裂解法和煮沸法
线粒体、叶绿体DNA的提取,主要是差速离心结合SDS裂解法;基因组DNA- CTAB法; CTAB提取缓冲液的经典配方; CTAB法流程图;基因组DNA-SDS法; SDS法流程图 (以动物组织为例) ;基因组DNA-其它方法;质粒DNA-碱裂解法; 碱裂解法流程图;DNA提取的基本步骤;材料准备;细胞裂解;核酸分离、纯化;蛋白质的去除:
酚/氯仿抽提
使用变性剂变性(SDS、异硫氰酸胍等)
高盐洗涤
蛋白酶处理
多糖的去除:
高盐法:用乙醇沉淀时,在待沉淀溶液中加入1/2体积的5M NaCl,高盐可溶解多糖。
用多糖水解酶将多糖降解。
在提取缓冲液中加一定量的氯苯(1/2体积),氯苯可以与多糖的羟基作用,从而去除多糖 。
用PEG8000代替乙醇沉淀DNA:在500μL DNA液中加入200μl 20
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