HE染色操作.docVIP

几种HE染色方法比较 ? 摘??要：HE是苏木精（hematoxylin）和伊红（eosin）的首个字母缩写。苏木精是碱性染料，使细胞核染色质和胞质内的核糖体呈紫蓝色。伊红是酸性染料，使细胞质和细胞外基质中带较强碱基的蛋白质成份着红色。通过本实验掌握石蜡切片HE染色技术，探讨一种适合动物材料的最佳HE染色方法。我们分别用不同固定液固定兔颈总动脉，用不同HE染色方法染色，比较不同方法的效果。染色结果是细胞核与细胞浆呈蓝红相映，色泽比较鲜艳。改良Harris法染色效果最好，染色效果受组织病理变化情况影响，有个体差异。 关键词：HE染色；改良Harris法；改良Lillie-Mayer’s法；改良Mayer法； 1??引言 在病理学实验课中，要观察大体标本和镜下标本，为了能更好的掌握实验课中所学的知识和内容，尤其是镜下标本，熟悉病理组织的制片技术是非常重要的，这对能否看好切片有很大帮助，它是教学、医疗、科研中必不可少的重要组成部分。 染色原理和机制尚无定论，处于学说阶段。可能既是化学反应，又有物理作用参加。从化学角度看，动物或植物细胞内，一般有酸性和碱性部分的区分。含有酸性物质的部分能与溶液中的阳离子结合，含有碱性物质的部分能与溶液中的阴离子结合。例如细胞核，特别是核内的染色质，一般认为是酸性物质组成的，其中主要是核酸，故它与碱性染料的亲和力很强，易于染色，例如氧化苏木素铬盐因为碱性燃料中的碱性部分有染色作用的是阳离子，而细胞浆则相反，它含有碱性物质和酸性染料的亲和力很大易于染上它的颜色，如伊红，因为是酸性染料中的酸性部分有染色作用的是阴离子，所以细胞核为碱性染料苏木素所染，细胞浆为酸性染料伊红所染。细胞内核的染色质、粘液和软骨的基质多染碱性染料。但必须注意的是，嗜碱性和嗜酸性是相对的而不是绝对的，若细胞在盐基性染液内置留过久，胞浆也可着上盐基性染料的颜色。相反，若细胞浆在酸性染液内置留过久，胞核也能着色。从物理角度看，在染色过程中，染液中的色素微粒子浸入到被染组织的粒子间隙内，此时，因受到分子的引力作用，色素微粒子被吸附而着色。由于各种组织有不同的吸附能力和不同的吸附程度，因此就可显出来不同的颜色来。 本实验主要针对常规HE染色方法的不足，从固定剂的特性、用量、染色剂用量和染色方法、染色条件等几个方面加以调整和改良，找出效果比较理想的切片染色方法。实验采用苦味酸和福尔马林两种方法来固定，改良Harris法、改良Mayer法、改良Lillie-Mayer’三种HE染色方法, 两种伊红染液（0.7%酸化伊红和0.5%水溶性伊红染液）进行实验。 2??材料及方法 2.1?实验材料??新西兰大白兔两只，分别为2.8kg和2.7kg。 2.2?主要试剂??70%酒精，80%酒精，95%酒精，无水酒精，蒸馏水，苦味酸，苏木素，硫酸铝钾，红色氧化汞，冰醋酸，甘油，碘酸钠，钾明矾，浓盐酸，碳酸氢钠，硫酸镁，二甲苯（固定液），伊红Y ，1%稀氨水，浓度为10％的甲醛固定液，石蜡，试剂均为分析纯。 2.3用品与仪器??烧杯（1000ml??100ml 50ml），量筒（1000ml 10ml），漏斗，滤纸，玻璃棒，移液管，洗耳球，载玻片，盖玻片，滴管，镊子，解剖刀，标签纸等。仪器见表1所示。 表1?主要仪器型号表 仪器名称型号制造厂家切片机OPJ-1B天津天利航空机电有限公司电子天平sartorius北京赛多利斯仪器系统有限公司倒置显微镜OLYMPUS IX71日本进口恒温箱HH.BⅡ上海跃进医疗器械厂水浴锅DZKW-4北京中兴伟业仪器有限公司电炉DL-1北京光明医疗仪器厂? 2.4?实验方法??将新西兰大白兔通过注射空气致死后，进行颈部解剖手术分别取其左右颈总动脉，用苦味酸和福尔马林两种方法来固定，并进行改良Harris法、改良Mayer法、改良Lillie-Mayer’三种HE染色方法的改良实验，最后用倒置显微镜进行镜检观察分析。 3??实验步骤流程 实验的具体方案见表2： 表2 ?HE染色实验方案 第一组第二组苦味酸固定法中性福尔马林固定法苏木素染色方法不同苏木素染色方法不同改良的Harris法改良Lillie-Mayer’s法改良迈耶法改良的Harris法改良Lillie-Mayer’s法Gill法分别对三种方法采用两种伊红染色： 0．7%酸化伊红法 0.5%水溶或醇溶性伊红染液分别对三种方法采用两种伊红染色： 0．7%酸化伊红法 0.5%水溶或醇溶性伊红染液? 3.1??组织的取材与固定? 取材是根据实验的目的和要求以及病变的程度而合理取得的组织材料。取材的正确与否直接影响到病理诊断的结果。固定是将需保留制成标本的脏器或病变组织，浸入