1.2基因工程的操作程序分析.ppt

复习：; (3) DNA末端:限制酶切割DNA产生的DNA末端有两种形式:______和_______. 2. DNA连接酶----”分子缝合针” (1)作用:将双链DNA____,恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的______. (2)种类: ①E.coli DNA连接酶:只能缝合DNA的_____ ②T4 DNA连接酶:既可缝合DNA的 ,又可缝合双链DNA的_______.; 3.基因进入受体细胞的载体----”分子运输车” (1)载体的种类 ①质粒:是一种裸露的,结构简单,独立于细菌染色体之外,并能够自我_____能力的双链______ DNA 分子;②______的衍生物;③________. (2)载体的特点 ①能够在细胞内_______;②有一个或多个____切割位点,便于供源DNA的插入. ③具有_____基因,供重组DNA的鉴定和选择.;§1.2 基因工程的基本操作程序;基因工程培育抗虫棉的简要过程：;;一、目的基因的获取;1、原核细胞的基因结构;1、原核细胞的基因结构; RNA聚合酶能够识别调控序列中的结合位点，并与其结合。;①不能转录为信使RNA，不能 编码蛋白质。;;真核细胞的 基因结构;;启动子 起始密码 /终止子 /终止密码;;1、从基因文库中获取目的基因;基因文库的类型;基因文库的构建; 反转录法;依据：目的基因已知的部分核苷酸序列;②将硝酸纤维膜盖在培养有该种基因文库菌落的培养基上， 将菌落转移到硝酸纤维膜上， 然后使DNA暴露、变性成单链固定在膜上。;③将第一步准备好的探针和其混合，让两种DNA链杂交。;③将第一步准备好的探针和其混合，让两种DNA链杂交。;③将第一步准备好的探针和其混合，让两种DNA链杂交。;①将目的基因已知的部分核苷酸序列用放射性同位素进行标记，作为探针。 ②将硝酸纤维膜盖在培养有该种基因文库菌落的培养基上，将菌落转移到硝酸纤维膜上，然后使DNA暴露、变性成单链固定在膜上。 ③将第一步准备好的探针和其混合，让两种DNA链杂交。 ④将x光片放在膜上，让其放射自显影，经过冲洗这时有放射性的部位X光片上会出现的黑斑。 ⑤根据这个黑斑对应的位置就可以找到培养基中的菌落，然后从该菌落中提取目的基因就可以。;;;依据：目的基因的有关信息。 如：根据基因的核苷酸序列 基因的功能 基因在染色体上的位置 基因的转录产物mRNA 基因翻译产物蛋白质等特性;2、利用PCR技术扩增目的基因;① 概念：PCR全称为_______________，是一项 在生物____复制___________的核酸合成技术 ;;④过程：;IMN;细胞内复制 PCR扩增;3.人工合成：;二、基因表达载体的构建——核心;质粒;a、使目的基因在受体细胞中稳定存在并遗传给子代;3.基因表达载体的组成：;常用的受体细胞：;;农杆菌转化法;适用于 单子叶植物;花粉管通道法;将目的基因导入受体细胞;显微注射技术;将目的基因导入受体细胞;;14N;DNA分子杂交示意图 ;基因探针，是一段带有检测标记，且序列已知的，与目的基因互补的核酸序列。 　基因探针通过分子杂交与目的基因结合，产生杂交信号，能从浩翰的基因组中把目的基因显示出来。 ;;14N;基因工程的基本操作程序;巩固练习: 1.人们常选用的细菌质粒分子往往带有一个抗生素抗性基因,该抗性基因的主要作用是 ( ) A.提高受体细胞在自然环境中的耐药性 B.有利于对目的基因是否导入进行检测 C.增加质粒分子的分子量 D.便于与外源基因连接 2.在遗传工程技术中,限制性内切酶主要用于 ( ) A.目的基因的提取和导入B.目的基因的提取和检测 C.目的基因与载体的结合和导入 D.目的基因的提取与载体结合;3.在遗传工程技术中,下列何种目的基因一般以直接分离的方法获得 A.人的胰岛素基因 B.蚕的蚕丝蛋白基因 C.芽孢杆菌的抗虫基因 D.菜豆储藏蛋白基因 4.1976年,美国的科学家首次将人的生长抑制素释放因子的基因转移到大肠杆菌,并获得了表达,此文中的表达是指该基因在大肠杆菌 A.能进行DNA复制 B.能传递给细菌后代 C.能合成生长抑制素释放因子 D.能合成人的生长素;5．下列有关基因工程技术的正确叙述是（ ） A．重组DNA技术所用的工具酶是限制酶、连接酶和载体 B．所有的限制