MouseYLinkedZfyandZfyAreExpressedduringthe重点.ppt

Mouse Y-Linked Zfy1 and Zfy2 Are Expressed during the Male-Specific Interphase between Meiosis I and Meiosis II and Promote the 2nd Meiotic Division; ;鼠zfy1和zfy2基因是在研究鼠Y染色体上促进雄性发育的基因时首先被确定的；它们编码的蛋白质通过一个“锌指”结构域，调控其他基因的表达，这些基因在精子发生过程中发挥着重要作用。 这两个基因曾被预测在粗线期（zfy1和zfy2）和减数第一次分裂中期（zfy2）可以促进减数分裂。 然而，通过这些以往的研究，Y染色体上编码基因的附加作用都是被推断出来的。本研究的目的为了确定这些基因并且探究它们在减数分裂后期的功能。 ;我们使用了三个XO雄性小鼠模型，其Yp基因含量是递减的并且缺少Yq： XSxraO：X携带Yp-derived性-反转因子Tp(Y)1CtSxr-a， Tp(Y)1CtSxr-a可以提供几乎完整的Yp基因 XSxrbO ：X携带一个Sxra 衍生物Tp(Y)1CtSxr-b， Tp(Y)1CtSxr-b有1.3Mb的缺失(DSxr-b)，移除 了大部分Yp基因。 XOSry：仅有Sry基因 ;A. XY. XY雄性的Y短臂基因complement包含7个单拷贝基因，两个重复基因（重叠基因）和一个多拷贝基因。拟染色体区域（PAR）位于Y长臂远侧，在减数分裂产生XY性二价体的过程中介导配对和交换。;B. XSxraO. Yp-derived Sxra 性反转因子，附着在X PAR远端，提供几乎完整的Yp基因C.XSxrbO. Sxra-derived 缺失变体Sxrb有1.3Mb缺失( DSxr-b)移除6个单拷贝基因，跨越删除断点生成一个zfy2/1融合基因( {)。D.XOSry. 这个模型只有一个Y染色体基因，为睾丸决定因素Sry，作为一个位于常染色体的转基因。;E.Y*E 这个微型性染色体是X染色体从近端proximal到Amelx有一个缺失，+代表缺失位点。这个X染色体衍生物有一个完整的PAR，可以与XSxra ，XSxrb or X的PAR配对形成一个‘minimal性二价体。;后两种Yp-缺陷型模型在精原细胞增殖中有显著地抑制，我们通过添加Eif2s3y规避这种抑制。（Eif2s3y:精原干细胞扩增因子） X-染色体衍生物（用Y*X表示)规避MI 纺锤体组装检查点（MI SAC)/凋亡消除。;Figure 2. SYCP3抗体（绿色）和CREST（红色）染色6周龄XY和XEY*XSry睾丸的粗线期精母细胞扩散。方框显示XY和XEY*XSry雄鼠中 PAR-PAR性染色体联会，箭头指出了在一个XEY*XSry雄鼠???的一个未联会的Y*X染色体。;三个Y*X补充模型之间的PAR-PAR联会并没有显著差异。 剩余细胞要么X和Y*X PARs未配对，要么缺少一个可识别的Y*X。后一种情况可能是小Y*X染色体在细胞扩散中丢失。;A.单倍体圆形精子的百分比。 Yp-derived Sxrb和Sxra在Y*X存在的请况下促进减数第二次分裂。Sxra明显比Sxrb更有效。 ;实验内容与结果- Zfy1和/或Zfy2促进第二次减数分裂 ;B.单倍体圆形精子百分比;实验内容与结果-Zfx,zfy1和zfy2在减数第二次分裂前的间期转录;鼠zfy和zfx基因在间期次级精母细胞中表达。 间期次级精母细胞核与RNA FISH 探针杂交，通过用SYCP3 抗体(red, top panels)染色生精细胞将间期次级精母细胞从二倍体精子中分离出来。RNA FISH探针到编码基因的合适的定位是通过DNA FISH 确定。细胞核用DAPI染色（蓝色）。;检测到Y-bearing 次级精母细胞的zfy1和zfy2的转录分别为45%和27%，在一半的次级精母细胞（X-bearing）中并没有观察到zfy1和zfy2 DNA-FISH信号并且它们也缺乏zfy1和zfy2RNA-FISH信号。然而，92%的这些X-bearing次级精母细胞转录为与之相关的X-linked 基因zfx;将这个转基因添加到XEY*XSry ，单倍体精子比例从15.0%增加到79.9%， 表明zfx可以促进减数第二次分裂。;体外分析比较zfx，zfy1,zfy2 和常染色体zfa的反式激活结构域， zfy2比zfy1具有更强有效的酸性结构域。Zfx比zfy1的更弱。; 我们以前关于三个具有不同的补体的XO雄性模型减数分裂的研究显示，在Yp基因