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第1章 酶催化反应动力学 1.1.2.2 酶反应的专一性机制 锁钥学说 诱导契合学说 过渡态学说 1.1.2.3 酶反应的高效性机制 酸碱催化 共价催化 邻近及定向效应 扭曲变形和构象变化效应 多元催化与协同 1.3.6 不可逆抑制动力学 变构酶又称为调节酶，它是一种寡聚酶。这类酶具有变构部位和活性部位。 当底物分子与这类酶结合时，能诱导酶的结构改变，增加酶与底物的结合能力，表现出底物对酶的激活效应。 变构酶的作用机理十分复杂。已提出的模型有渐变模型，同构模型等。 对变构酶催化反应动力学的描述通常采用的是Hill方程，可表示为： 1.6 酶的界面催化反应动力学 1.6.1 液-固界面的酶催化反应动力学 当底物生成产物反应为C[ES]的一级反应时， 1.6.2 液-液界面的酶催化反应动力学 建立M-M方程的基本假设 通过快速平衡假设、拟稳态假设和速率控制步骤建立M-M方程的方法 M-M方程的主要动力学特性----反应速率与底物浓度的关系 动力学参数的求法 由稳态及酶衡算得: 1.4.2 双底物酶催化反应动力学 1.4.2.1 随机机制 两个底物S1和S2随机地与酶结合，产物P1和P2也随机地释放出来。 如 为常数，则 式中： 如 均为变量则: 1.4.2.2 顺序机制（大部分脱氢酶） 两个底物S1和S2与酶结合成复合物是有顺序的，酶先与底物 S1结合形成[ES1]复合物，然后该复合物[ES1]再与S2结合形成具有催化活性的[ES1S2]。按同样推导方法求出下述方程式： 式中：Km—S1为单底物时的米氏常数，mol/L; Kms1—S2浓度饱和时，S1的米氏常数，mol/L; Kms2—S1浓度饱和时，S2的米氏常数，mol/L; 1.4.2.3 乒乓机制 1.4.2.3 乒乓机制 S1、S2始终不同时与酶结合，其机理可表示为（E*为修改过的酶）： 1.4.3 变构酶催化反应动力学 底物分子与这类酶结合时能诱导酶的结构改变增加E与S的结合能力，表现出底物对酶的激活效应。 Hill经验公式： 　 有磷酸果糖激酶、天冬氨酸转氨甲酰酶、苏氨酸脱氢酶等 底物分子与这类酶结合时能诱导酶的结构改变增加E与S的结合能力，表现出底物对酶的激活效应。 有磷酸果糖激酶、天冬氨酸转氨甲酰酶、苏氨酸脱氢酶等 1.5 反应条件对酶反应速率的影响 内部因素：酶的结构特性，底物的结构特性。 外部因素：pH、T、P、离子强度、各种物质的浓度因素 1.5.1 pH值的影响 酶分子上有许多酸性和碱性的氨基酸侧链基团，如果酶要表示其活性，则这些基团必须是特定的解离形式。 随着pH的变化，这些基团可处在不同的解离状态，而具有催化活性的离子基团仅是其中一种特定的解离形式，因而随着pH值的变化，具有催化活性的这种特殊的离子基团在总酶量中所占的比例就会不同，因而使酶所具有的催化能力也不同。 Michaelis对pH与酶活力的关系提出三状态模型的假设： 由上式可以看出，f1和f2均与pH值有关。 对酶催化反应，适宜的pH值约处于6～9之间。 1.5.2 温度的影响 在适宜的温度内，酶催化反应速率常数中的k+2与温度的关系符合Arrhenius方程，即： k+2 Aexp -Ea/RT 酶失活的活化能通常比酶反应的活化能高 1.5.3 酶的失活动力学 酶是一种不稳定的物质，常因温度、pH等因素的影响而产生不可逆的活性下降。一般是胞外酶较稳定，而胞内酶在外部环境中容易失活。酶在保存和参与反应时均有可能失活，前者的失活又称为静态稳定性。在使用时酶的失活对于酶催化反应过程的设计和控制都是十分重要的。其中酶的热失活，或称热变性是最重要的一种酶失活形式。下面主要讨论此种失活动力学。 未反应时酶的热失活动力学 测定酶在未反应时的热稳定性方法：在一定条件下，使酶溶液恒温保持一定的时间，然后再在最 适宜的pH和温度下测定残存的酶活力，即残存酶活。 cEo＝cE + cD 对于可逆的： 对于不可逆的失活反应，kr 0，因此： 反应时酶的热失活动力学 酶在反应中的稳定性称为操作稳定性。在酶催化反应时，由于底物和产物的存在，使酶的稳定性或者得到增强，或者又有所减弱。 kd Ei δkd Ei+S δ＝1时，底物对酶失活没有影响 δ＝0时，酶完全被底物所保护，[ES]完全不失活，此时只有游离酶失活 0 δ 1时，底物对酶有部分保护作用，能在一定程度上抑制酶的失活 δ 1时，底物加速酶的失活 Ef指游离酶 酶在底物上的吸附平衡 而 4 Eisenthal和Cornish-Bowden直接线性作图 将M-M方程取倒数，两边均乘以rmax： 应用直线作图法求取动力学参数── 微分法 a L-B法； b H-W法； C