四川黑茶渥堆过程中纤维素酶、果胶酶分泌菌株的筛选和其产酶条件优化.pdfVIP

万方数据 摘要四川黑茶具有独特的地域性和政治特征，其品质高低直接影响边疆少数民族同胞的身体健康、边疆稳定和民族团结。渥堆作为四川黑茶品质形成的关键工序，其湿热环境有利于微生物的生长、繁殖，渥堆微生物所分泌的纤维素酶、果胶酶等水解酶类对四川黑茶品质的转化及形成功不可没。研究者对黑茶渥堆过程的微生物进行了大量研究，但对四川黑茶渥堆微生物所分泌的纤维素酶、果胶酶及其相关性质的研究却未见报道。因此，明确四川黑茶渥堆微生物中分泌纤维素酶、果胶酶的主要微生物种类，研究其纤维素酶特性，深入分析其在四川黑茶品质形成中的具体作用，对于扩大食品等行业纤维素酶、果胶酶微生物来源及其进一步应用，缩短四川黑茶生产周期，提高其品质具有重要意义。此外，进一步探索和优化微生物纤维素酶产酶条件，对于提高微生物纤维素酶活性具有重要??实践意义。本研究拟采用分子生物学、生物信息学手段，微生物平板技术及常用手段相结合的方式，筛选四川黑茶渥堆微生物中纤维素酶、果胶酶分泌菌株，并对其酶学特性进行研究，对纤维素酶分泌菌株的产酶条件进行探索和优化。此外，采用液态发酵的方式分析纤维素酶、果胶酶分泌菌株对液态茶品质成分的影响。主要研究结果如下：??铀拇ê诓桎锥盐⑸?镏泄采傅梅纸庀宋?匦Ч?虾玫木???辏?渲校?酵母菌?辏?咕?株，放线菌?辏?妇?株，其分解纤维素能力大小依次为：放线菌?妇?酵母菌?咕?Ｒ∑糠⒔透瓷甘笛榉⑾郑?畔呔?置谙宋?孛富?性整体高于细菌和真菌，综合初筛、复筛结果，选择??????、???号菌株为分泌纤维素酶的高产菌株。分子生物学分析结果分别将??????、???啪?瓿醪郊?ㄎ狝?????????黑曲霉?????????枯草芽孢杆菌????????????一??矸勖噶疵咕?侵?。摇瓶培养期间，???啪?昶渚?株生物量随培养时间的延长呈现逐渐增加的趋势，而其???和??富钚?并未出现大幅度的变化：使???啪?甑腃???富畲锏阶畲笫钡拿阜从??为??蛊銫???富罱细叩拿阜从ξ露纫来挝????。??????。??，．????????????????產???????? 万方数据 合设计实验对培养基组分及浓度进行优化，得出利于纤维素酶分泌菌株?????铀拇ê诓桎锥盐⑸?镏谐跎傅玫椒置诠?好感Ч?厦飨缘木?旯??辏?关键词：四川黑茶；渥堆；微生物；纤维素酶；果胶酶；筛选；产酶优化??谝禾迮嘌??榉旨芭ǘ扔呕?牡ヒ蛩厥笛榛?∩希?捎枚?瓮ㄓ眯?W?产???的液体培养基组分配比为：葡萄糖???ィ?Ｈ飧?．?％，氯化钠???ィ?姿崆舛??．?％，利于菌株产??囊禾迮嘌??榉峙浔任#浩咸烟????ィ?Ｈ飧郞．?％，氯化钠???ィ?姿崆舛?豋．?％。在摇床培养条件优化的单因素实验基础上，利用二次通用旋转组合设计实验对摇床培养条件进行优化，得出利于????闏???富钐岣叩囊〈才嘌?跫?#壕?杲又至??，发酵培养时间?，摇床培养温度???Ｊ笛樗?疾斓?个因素对??富畹挠?响均较小，??富羁赡芑故艿狡渌?幢豢悸墙?笛榉桨傅囊蛩厮?跋臁?其中，酵母菌?辍Ｃ咕?株，放线菌?辏?妇?株。摇瓶发酵复筛实验测得各类群微生物分泌果胶酶活性依次为放线菌?妇?霉菌?湍妇?＝岷铣跎浮?复筛结果选得??????、???啪?晡7置诠?好傅母卟??辍７肿?生物学分析结果分别将??????、???啪?瓿醪郊?ㄎ狿?????????胀ㄇ嗝?、??????????????热紫链霉菌?????密旋链霉菌????傅玫姆置谙宋?孛浮⒐?好感Ч?虾玫木?暝谝源坎杼牢E嘌??牡ゾ?液体发酵实验中均能造成茶汤中茶多酚含量的降低；除???啪?晖猓???造成茶汤中茶黄素含量的增加：供试菌株对茶汤茶红素、茶褐素含量的影响相对比较复杂：除??、?、?号菌株外，所有试验菌株相较空白对照均能使茶汤中氨基酸含量得到提高；与空白对照相比，??????????????????啪?攴直鹗共杼乐锌扇苄蕴呛?吭黾樱?鳶??????????????、?号菌株则分别使茶汤中可溶性糖含量降低；除???啪?晖猓?匝椴?汤中水溶性果胶含量相较空白对照均出现增加的情况。?????????????? 万方数据 阛???—??????，???‘??????????痠????????????甅?????????????????????????．???????????????甌?????????瓵???????．???????琾?????????????—???????????????????甀???????????????，???????甈???????????甀?????，?????，??????????????瓵??．???甀???????????瑂????????甋????琒??