人类基因组DNA提取详解.ppt

人类基因组DNA提取 ;人类基因组; 1.真核生物DNA一般存在于细胞核染色体上以及线粒体上，基因组DNA一般又称核DNA。 2.哺乳动物的一切有核细胞都可以用来制备DNA，除特殊要求外，白细胞、肝或脾组织是最常用的材料。 3.原始材料较少或较难获得时，还必须经过细胞培养来获得足够量的细胞;有时为了简便易行起见，还可以无创伤地采集材料，如用口腔上皮细胞、发根细胞。产前诊断所用的材料为胎儿的羊水细胞或绒毛膜细胞。 ;基因组DNA提取主要步骤;二、DNA提取不同方法： 1.酚抽提法：先用蛋酶K、SDS破碎细胞，消化蛋白，然后用酚和酚-氯。 2.甲酰胺解聚法：破碎细胞同上，然后用高浓度甲酰胺解聚蛋白质与DNA的结合，透析获得DNA。 3.玻璃棒缠绕法：盐酸胍裂解细胞，裂解物铺于乙醇上，用带钩或U型玻璃棒在界面轻搅，DAN沉淀液绕于玻棒。 4.异丙醇沉淀法：基本同1法，仅用二倍容积异丙醇替代乙醇，可去除小分子RNA（在异丙醇中可溶状态） 5.表面活性剂快速制备法：用Triton X-100A或NP40表面活性剂破碎细胞，然后用蛋白酶K或酚去除蛋白，乙醇沉淀或透析。 6.加热法快速制备：加热96℃-100℃，五分钟，然后离心后取上清，可用于PCR反应。 7.碱变性快速制备：先用NaOH作用20分钟，再加HCI中和，离心后取上清，含少量DNA。 ;三、DNA的浓缩不同方法