微生物实验指导重点.doc

实验一 微生物培养基的配制和灭菌 培养基是将微生物生长繁殖所需要的各种营养物质，用人工方法配制而成的各种营养基质。它具有微生物正常生活所需的各种养料和适宜的环境条件：(1)适当组分和比例的营养物质；(2)适宜的pH值；(3)合适的渗透压；(4)保持无菌状态。所以培养基是培养微生物所必需的最主要材料。培养基的配制是微生物工作者的主要技术操作之一。 一、实验目的与耍求： 1．了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程。 2．了解几种灭菌方法，掌握干热灭菌法和加压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。 3．熟悉分离、培养微生物前的有关准备工作及操作方法。 二、实验原理与材料： (一) 培养基的种类 根据培养基的组成成分，可将培养基分为三类：合成培养基：由各种纯化学物质按一定比例配制而成。 半合成培养基：由一部分纯化学物质和另一部分天然物质配制而成。 天然培养基：利用天然来源的有机物配制而成的。 从培养基的物理状态来分： 液体培养基：不加凝固剂。 固体培养基：在液体培养基中加2％左右的凝固剂。 半固体培养基：在液体培养基中加入0.2％一0.5％凝固剂。 微生物最常用的凝固剂为琼脂(其次为明胶)，又叫洋菜、冻粉。它不是一种营养物质，只能被极少数种类的细菌分解利用。琼脂是从海藻中(主要是石花菜)提取而制成的。是一种多糖类化合物，主要成分是复杂的多糖硫酸酯钙盐，琼脂是一种可逆性胶体，在常规浓度下加热到96℃以上即成溶胶状态，融化的琼脂，当温度下降到42℃以下，又凝固为固体。 表3-1 琼脂与明胶特性比较 比较项目 琼 脂 明 胶比较项目琼 脂明 胶 熔点(℃) 凝固点(℃) 酸碱度 灰 分(％) 氧化钙(％) 氯化镁(％) 氮(％) 96 40 微酸 16.0 1.15 O.77 O.40 25 20 酸性 14.0—15.0 0.0 0.0 18.3微生物可利用性 耐热性 来 源 化学本质 常用浓度（％)绝大多数微生物不能水解利用 强 植物 多糖 1.5—2部分微生物能水解利用 弱 动物 蛋白质 5一12 （二）实验材料 1．药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂；马铃薯，蔗糖；可溶性淀粉、K2HPO4、 KN03，MgS04·7H20、FeSO4·7H20、等。 2．高压蒸汽灭菌器、恒温干热灭菌箱、细菌过滤器、紫外线杀菌。 3．其它：天平、牛角匙、电炉、1N HCl、1N NaOH、pH试纸、刻度搪瓷杯、量筒、漏斗、漏斗架、玻棒、带玻璃珠的三角瓶、带棉塞的无菌试管、无棉塞的空试管、培养皿、吸管、各种包装纸、防水纸、绳索、棉花、标签等。 三、实验方法与步骤： (一)、培养基的配置 1．培养基的配制常用方法和步骤： (1)称量：按照培养基配方，正确称取各种原料放于搪瓷杯中。 (2)溶化：在搪瓷杯中加入所需水量(根据实验需要加入蒸馏水或自来水)，用玻棒搅匀，加热溶解。 (3)调pH值(调pH也可以在加琼脂后再调)，用1N NaOH或1N HCl调pH，用pH试纸对照。 (4)加琼脂熔化，在琼脂熔化过程中，需不断搅拌，并控制火力不要使培养基溢出或烧焦，待完全熔化后，补足所失水分，一般数量少，时间短不必补水。 (5)分装：在漏斗架上分装。根据不同的需要进行分装，一般制斜面的装量为管高的五分之一。 特别注意不要使培养基粘污在管(瓶)口上以免浸湿棉塞，引起污染。 (6)包扎成捆、挂上标签。培养基分装好后，塞上棉塞，用防水纸包扎成捆，挂上所配培养基名称的标签。 (7)灭菌备用。灭菌后如需制成斜面的，应在下磅后取出，摆成斜面，(见图3一1)。培养基经灭菌后，必须放在37℃恒温培养箱中培养24小时，如确无菌生长，方可使用。 2．三种培养基的配方及配制 （1）.牛肉膏蛋白胨琼脂培养基(用于分离和培养细菌，是一种天然培养基)。 配方： 牛肉膏 3克 蛋白胨 5克 氯化钠 3克 琼脂 20克 自来水 1000毫升 pH 7．2～7．4 灭菌 15磅／英寸2，30分钟。 本实验将原