总RNA提取试剂.docVIP

总RNA提取试剂RNAtrip 货号：M09015 RNAtrip成功避开各种商业RNA提取试剂盒的种种弊端，采用最新技术和工艺，在提取过程中既能有效裂解组织细胞，强烈抑制RNA酶活性保护RNA免受降解同时极为有效地分离去除DNA和蛋白质RNAtrip使RNA分离如同提取质粒DNA一样简单可靠，可在30-60分钟内完成获得极高纯度的总RNA沉淀可用于RT-PCR、Northern Blot、RNA酶保护、Poly A mRNA纯化、体外翻译等实验。储存4 oC密封避光保存两年以上有效。然而因疏忽或冰箱意外停电，RNAtrip密封避光存放于25 oC室温数个月，品质不受影响。 适用 1 固体组织 100 mg /ml : 人、动物、植物的各种新鲜或冻存组织。 2 培养细胞 5~10 106细胞/ml : 真核细胞，细菌，酵母。 3 液体标本 100 μl/ml : 全血、体液、尿液，病毒样品等。 用户实验用品和操作准备 极微量的RNA酶都会导致RNA降解。分离RNA时RNA酶污染主要来自以下五个方面： 1 来自实验人员的双手。 2 来自器皿、吸头离心管、自备液体。 3 组织细胞破碎不可避免地释放内源RNA酶。 4 RNA未能完全与蛋白质分离。 5 RNA沉淀和溶解时来自吸头离心管和溶液。我们的Step by Step质量监测表明，RNAtrip可100％抑制RNA酶活性，并在分离步骤完全清除RNA酶。因此在有RNAtrip存在的步骤中，使用高压消毒20分钟的吸头离心管和溶液即可胜任RNA提取操作。然而在RNA溶解之后，来自实验材料的RNA酶污染将会导致RNA降解，应严格使用高压灭活RNA酶的用品。戴手套无疑是有益的，但戴口罩和帽子则无必要。只要严格按照本指南进行准备和操作，使用RNAtrip总是能获得高纯度RNA。 固体组织破碎设备。准备下列装置之一，1 玻璃匀浆器。必要时泡酸清洁，用高压灭菌蒸馏水洗涤数次。2 研钵。适用于液氮冻存组织的研磨，清洗同玻璃匀浆器。3 组织细胞超声破碎仪器。探头插入装满蒸馏水的试管或烧杯中，开启超声清洗探头30秒至1分钟。4 高速机械匀浆器 Polytron，Tekmar或类似产品 。打开开关，在蒸馏水中清洗分散器头数次。对这些装置的部分部件高压消毒30分钟是保险的措施，但使用RNAtrip这种处理并不必要。 高压蒸汽30分钟消毒一次性吸头离心管。RNA沉淀和溶解之后，应严格使用高压消毒的一次性用品。然而RNAtrip能在RNA酶污染环境下工作，在裂解步骤可使用未高压但洁净的一次性吸头和离心管，但仅推荐在紧急情况下这样做。比如由于不可预测的原因，动物已经处死，组织已取出，细胞已收取，而吸头和离心管尚未高压处理。这仅仅适用于RNAtrip试剂，对其它来源RNA提取试剂无效。此时保险做法是使用普利莱基因技术公司的另种产品――组织RNA保护液 Cat# R1030 ，用户可把来不及处理的标本保存在RNA保护液中，37 oC保存3天，25 oC保存2周，4 oC保存4周，－20 oC保存数月，固体或液体标本中RNA不会降解。 DEPC处理的双蒸水。加DEPC到水中至终浓度为0.01% v/v，室温过夜，高压消毒30分钟。用于溶解RNA，配制TE缓冲液和75％乙醇。普通双蒸水高压消毒30分钟，用于冲洗器皿，配制琼脂糖凝胶和电泳用缓冲液。注意溶液配制后高压灭菌，但琼脂糖不能高压处理。异丙醇，氯仿，纯乙醇，分析纯。电泳槽，双蒸水冲洗。离心机和加样器，无需处理。 冰盒和湿冰。在冰上进行操作有助于减少RNA降解。 戴手套。提取质粒DNA使用大量RNA酶，为防污染须特别清洗实验器具和实验区域。 RNA提取程序 1. 组织细胞破碎与裂解 冰上操作。立即并快速破碎组织至关重要。组织细胞过量不仅使RNA得率下降，还将导致DNA和蛋白质污染。在紧急情况下，如动物已处死，组织已取出，细胞已收取，异地取送标本，用户尚未做好实验准备时，推荐用户把组织细胞储存在RNA保护液 Cat# R1020 中，标本中的RNA不降解。 1 固体组织。按比例每50-100 mg组织加1 ml RNAtrip试剂。用研钵研磨仅适用于液氮冻存组织组织放在研钵中研成粉末，加1 ml RNAtrip试剂，继续研磨至组织完全裂解。用玻璃匀浆器匀浆：加入RNAtrip上下手动匀浆组织10-15次。用高速机械匀浆器：将组织放入塑料试管内，试管置冰浴烧杯中，加入RNAtrip试剂，将分散器头垂直插入管内与组织块接触，转速12,000-20,000 rpm，上下移动试管10-20次，直到组织完全打散，无肉眼可见大块。用超声仪：需根据机器型号进行预试验，选取有效破碎组织的功率和时间。 mg组织可获得足量的RNA，对绝大多数实验目的