10第十讲 蛋白质的分离纯化.pptVIP

第十讲 蛋白质的分离与纯化 第一节 分离纯化概述 一、分离纯化 保持蛋白质生物活性和化学结构的完整性前提， 将目标蛋白从细胞或组织成分中分离出来的过程。 二、纯化的最终目的 理论上：性质、结构、功能的分析与研究 实践上：满足实际应用的需要，如：诊断试剂、药物、酶等。 三、如何理解分离纯化与分析检测（三个层次） 分析研究的需要——要求对样品进行分离纯化，消除干扰物：如：蛋白质、核酸等结构与功能关系的分析； 定量分析：消除干扰物质 物质分离纯化过程中离不开分析检测 —定向分离 分离对象的收集，含量、纯度、回收率检测； ——分离过程的控制与管理 分离纯化过程——即是定性和定量检测的过程 如：电泳、HPLC、GC、薄层层析等； 第二节 纯化前处理 预处理 取样或原料：动物组织或植物组织取材、清洗和切割，细胞分离与收集 材料保存条件：一般及时处理、甚至冷冻保存。Why？ 细胞破碎 机械法：匀浆、研磨、压榨（高压细胞破碎仪？）等 物理法：超声波、反复冻融、渗透压 等 化学或生物法：自溶、酶溶、化学渗透（甲苯等）、表面活性剂 等 蛋白质抽提 水、缓冲液、稀盐、稀酸、稀碱溶液抽提（料液比恰当？温度？pH？） 表面活性剂、有机溶剂（脂结合蛋白）等抽提 抽提蛋白的保护——防酶解、蛋白变性 控制pH、蛋白酶抑制剂、控制温度（低温或高温） 如： EDTA——金属酶 如：二异丙基氟