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药物色谱分析-5高效液相色谱法分类及仪器装置 齐永秀 药物分析教研室 一、高效液相色谱法的定义及分类 二、高效液相色谱法的特点 三、高效液相色谱仪的基本装置 高效液相色谱（HPLC）：在经典液相色谱法基础上,采用 GC理论和实验技术,以高压输液系统、高效固定相、高灵 敏检测系统形成一种分离和分析方法。 HPLC特点： “三高”、“一快”、“一广” 高选择性—可将性质相似的组分分开；高效能—柱效可 达30000块/米，多次利用组分性质差异进行分离；高灵 敏度—10-9~10-12g，适于痕量分析；分析速度快—几~几 十分钟完成分离分析,一次可测多种样品；应用范围广 —80%有机物质能得到分析。 二、高效液相色谱法与经典色谱法的比较 二、高效液相色谱法与气相色谱法比较 1、分析对象差别 GC：能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品， 高沸点、挥发性差、热稳定性差、离子型及高聚物 的样品不能检测（占有机物的20%） HPLC：溶解后能制成溶液的样品，不受样品挥发 性和热稳定性的限制，且分子量大、难气化、热稳 定性差及高分子和离子型样品也可检测（占有机物 的80%） 2、流动相差别 GC：流动相为惰性气体，种类少，组分与流动相 无亲合作用力，组分只与固定相作用而实现分离 HPLC：流动相为液体，流动相与组分间有亲合作 用力，为提高柱的选择性、改善分离增加了有力因 素，且流动相种类较多，选择余地大。选用不同比 例的两种或两种以上液体作为流动相，可以使难分 离的组分得到很好的分离 3、操作条件差别 GC：加温操作 HPLC：室温高压操作（液体粘度大，峰展宽小） 三、HPLC主要类型和分离方法 三、高效液相色谱仪的基本装置 三、高效液相色谱仪的基本装置 1.高压输液系统 (一)储液罐(对洗脱液化学惰性,预先脱气) 常用脱气方式:真空脱气机脱气法 超声波脱气法：500ml溶液约20~30min 吹氦脱气法 三、高效液相色谱仪的基本装置 1.高压输液系统 (二)高压输液泵 要求：流量稳定、输出压力高、流量范围宽、耐酸 碱和缓冲液腐蚀、泵体易清洗 类型：往复柱塞泵、注射泵、气动放大泵、液压隔 膜泵 三、高效液相色谱仪的基本装置 1.高压输液系统 (三)梯度洗脱装置 低压梯度洗脱装置： 高压梯度洗脱装置： 三、高效液相色谱仪的基本装置 2.进样系统 自动进样器进样 六通阀进样 三、高效液相色谱仪的基本装置 3.色谱柱 要求:分离度高、柱容量大、分析速度快 结构：增加色谱柱的柱长可以提高柱效，目前的 装填设备和技术，只能保证柱长在100~250mm之间 获得好的效果。 三、高效液相色谱仪的基本装置 4.检测器 要求:灵敏度高、响应对流动相流量和温度不敏感、不引起柱外谱带展宽、线性范围宽、适用范围广 类型：紫外吸收检测器（UVD），蒸发光散射检测器 （ELSD），折光指数检测器（RID），电导检测器 （ECD），荧光检测器（FLD）和质谱检测器（MSD） 三、高效液相色谱仪的基本装置 4.检测器---光电二极管阵列紫外检测器 同时得到多个波长的色谱图 对每个色谱峰的指定位置实时记录吸收光谱图 在色谱运行期间逐点进行光谱扫描,得到时间- 波长-吸光度三维图形 可以选择整个波长范围内的宽谱带检测,一次进样,所有组分均能检测 三、高效液相色谱仪的基本装置 4.检测器---光电二极管阵列紫外检测器主要应用特色 色谱峰的纯度检查:比较光谱法\吸收比法\双波长法 色谱峰的鉴定 谱带宽度检测 峰抑制 选择最大波长 三、高效液相色谱仪的基本装置 5.馏分收集器 6.数据处理及色谱工作站 谢谢各位！ 主要内容 一、高效液相色谱法的定义 主要区别：固定相、输液设备和检测手段差别 经典LC仅做为一种分离手段,HPLC可用于分离和分析 好 一般较差 定性定量准确度 能在线检测 不能在线检测 在线检测 可重复多次使用 只可用一次 色谱柱使用情况 快 慢 分析速度 1×104~1×106 10~100 柱效/每米理论塔板数 2~40 0.001~0.1 柱入口压力/MPa 0.3~0.46 2~5 柱内径/cm 5~25 10~100 柱长/cm ＜5% 20%~30% 固定相粒径分布/RSD 3~10 75 ~500 固定相粒度/?m 高效液相色谱法 经典柱色谱法 项目 四类基本类型色谱法 分配色谱法（组分在两相溶解性能的差异） 吸附色谱法（组分在两相吸附作用力的差异） 离子交换色谱法（离子交换能力的差异） 空间排阻色谱法（组分分子线团尺寸差异）