(用)动物细胞培养和核移植技术要点.pptVIP

3、动物细胞培养过程中几个重要的概念 （1）细胞贴壁： 悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上（单层）。要求：培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。 (3)原代培养 (primary culture) 定义：指将要培养的动物细胞取出后，先用胰蛋白酶等使组织分散成单个细胞，然后配制成一定浓度的细胞悬液，再将该悬液放入培养瓶中培养。 定义：当原代培养的细胞生长停止，这时如果要使细胞继续生长，就要及时用胰蛋白酶等，使细胞从瓶壁上解离下来，然后加入新的培养液，将细胞分离稀释，并从原培养瓶内转接到新的培养瓶内，这个过程称传代培养 1、无菌、无毒的环境 （添加一定量的抗生素，定期更换培养液） 2、营养 （葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清、微量元素等） 3、温度和PH 温度36.5+0.5度，pH7.2～7.4 4、气体环境 O2和CO2（95%空气和5% CO2 ） 知识点小结 * * 专题2.2动物细胞工程 动物细胞培养 动物细胞融合 单克隆抗体制备 细胞核移植 动物细胞工程技术 动物细胞工程的基础 2.2.1动物细胞培养和核移植技术 （一）、概念 是指从动物机体内取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。 （二）、原理 细胞分裂增殖 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 胰蛋白酶 剪碎 单个细胞 加培养液 制成 细胞悬液 培养瓶中培养 部分细胞“癌变”，无限传代 动物细胞培养不能 最终培养成动物体 50代细胞 原代培养 传代培养 贴壁生长 接触抑制 剥离、分瓶 细胞株此时遗传物质没有改变 细胞 细胞系遗传物质改变 2.动物细胞培养过程： 增殖能力强，分裂旺盛，分化程度低，容易培养 去掉组织间 蛋白 归纳 过程 取 的组织、器官 细胞悬浮液 酶 贴满瓶壁的细胞 单个细胞 加入 液 动物胚胎或幼龄动物 胰蛋白 培养 接触抑制 原代 培养 1-10代细胞 遗传物质 改变 原代细胞 培养 加 液 40—50代细胞(细胞株) 未 遗传物质 改变 无限传代（细胞系） 已 传代培养 胰蛋白 酶 （2）接触抑制： 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。 动物细胞培养特点： 贴壁生长、接触抑制： 过程：从动物机体中取出组织 ? 剪碎 ? 加胰蛋白酶? 细胞游离 ? 制成细胞悬液 ? 将细胞接种到培养瓶内 ? 培养（1--2天换一次培养液）? 细胞贴壁生长 ? 长成单层细胞 (4)传代培养 (subculture) （5）细胞株： 从原代培养细胞群中筛选出进行传代培养的细胞，能传到40-50代，其遗传物质没有发生变化。 细胞系： 传到40-50代后有部分细胞遗传物质发生了变化，带有癌变的特点，可能在培养条件下无限制的传代下去，这种传代细胞称为细胞系。 细胞株和细胞系的区别： 细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。 细胞悬浮液 培养瓶中培养 50代细胞 无限传代 原代培养 传代培养 细胞株 细胞系 各个新名词之间的联系 多数组织细胞固定在表面生长和分裂。 随细胞增多，细胞接触就会停止分裂增殖 遗传物质改变 思考题： 1、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？ 2、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？ 因为这些组织或器官，分裂能力旺盛，易于培养。 成块组织使细胞靠在一起限制了细胞的生长和增殖，且细胞不能与培养液充分接触，不利于培养。 3、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可说明细胞间的物质是什么成份？ 催化蛋白质水解。细胞间的物质主要是蛋白质(胶原蛋白等)。 4、细胞膜的主要成份是什么？ 蛋白质和磷脂 5、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？ 能 6、既然胰蛋白酶能将细胞消化掉，那将动物组织分散成单个细胞要注意什么问题呢？ 7、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？ 注意时间的控制 不能，因为两者的最适PH不同，用动物细胞培养适宜的PH为7.2—7.4，此环境下胃蛋白酶（2.0）没有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性较高。 4、动物细胞培养条件 保证细胞顺利的生长增殖 离体培养的细胞对微生物和有毒物质没有防御能力 5、动物细胞培养技术的应用 （1）生产蛋白生物制品：病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等。 （4）用于检测有毒物质 （3）获得大量自身的皮肤细胞，用于植皮。 （5）用于生理、病理、药理等方面的研究，为治疗和预防疾病提供理论依据 （2）作为基因工程的受体细胞 获得细