☆分子生物学常用试剂的配制要点.docVIP

分子生物学常用试剂的配制 3 1．LB(Luria-Bertani)培养液、平板的配制 3 2．琼脂糖凝胶的配制 3 3．P1、P2、P3的配制P1 的配制 3 4．常用缓冲液 3 TE 3 STE(亦称 TEN) 3 STET 3 TNT 4 Tris-乙酸（TAE） 4 Tris-磷酸（TPE） 4 Tris-硼酸（TBE） 4 碱性缓冲液 4 Tris-甘氨酸 4 30％丙烯酰胺 4 10mol/L 乙酸铵： 4 1mol/LCaCl2 4 2.5mol/LCaCl2 5 1mol/L 二硫苏糖醇（DTT）： 5 0.5mol/LEDTA(pH8.0)： 5 溴化乙锭（10mg/ml）： 5 1mol/LMgCl2： 5 酚：氯仿 5 磷酸缓冲盐溶液（PBS） 5 乙酸钾溶液（用于碱裂解） 5 3mol/L 乙酸钠(pH5.2 和 7.0) 5 1mol/LTris 5 Tris 缓冲盐溶液（TBS） 5 5mmol/LNH4Ac 溶液 5 10mg/mlBSA（小牛血清白蛋白）溶液 5 10%十二烷基硫酸钠（SDS） 5 实验室常用贮存液的配制参数 7 1．30%丙烯酰胺溶液 7 2．40%丙烯酰胺 7 3．放线菌素D溶液 7 4．0.1mol/L腺苷三磷酸（ATP）溶液 7 5．10mol/L乙酸酰溶液 7 6．10%过硫酸铵溶液 7 7．BCIP溶液 8 8．2×BES缓冲盐溶液 8 9．1mol/L CaCl2溶液 8 10．2.5mol/L CaCl2溶液 8 11．1mol/L二硫苏糖醇（DTT）溶液 8 12．脱氧核苷三磷酸（dNTP）溶液 8 13．0.5mol/l EDTA(pH8.0)溶液 8 14．溴化乙锭（10mg/ml溶液） 8 15．2×HEPES缓冲盐溶液 9 16．IPTG溶液 9 17．1mol/L乙酸镁溶液 9 18．1mol/L MgCl2溶液 9 19．β-巯基乙醇（BME）溶液 9 20．NBT溶液 9 21．酚/氯仿溶液 9 22．10mmol/L苯甲基磺酰氟（PMSF）溶液 9 23．磷酸盐缓冲溶液（PBS）溶液 10 24．1mol/L乙酸钾（pH7.5）溶液 10 25．乙酸钾溶液（用于碱裂解） 10 26．3mol/L乙酸钠（pH5.2和pH7.0）溶液 10 27．5mol/L NaCl溶液 10 28．10%十二烷基硫酸钠（SDS）溶液 10 29．20×SSC溶液 10 30．20×SSPE溶液 10 31．100%三氯乙酸溶液 10 32．1mol/L Tris溶液 10 33．Tris缓冲盐溶液（TBS）（25mmol/l Tris） 11 34．X-gal溶液 11 分子生物学常用试剂的配制 1．LB(Luria-Bertani)培养液、平板的配制 配制每升LB培养液，应在950ml去离子水中加入： 细菌培养用酵母提取物（bacto-yeastextract） 5g 细菌培养用胰化蛋白胨（bacto-tryptone）10g NaCl 10g 摇动容器直至溶质完全溶解，用5mol/LNaOH(约0.2ml)调节pH值至7.0，加入去离子水至总体积为1L，在 15 1bf/in2(1.034×105Pa)高压下蒸汽灭菌 20min。 LB 琼脂平板的配制： 先按上述配方配制液体培养基，临高压灭菌前加入琼脂糖 15g /L，同法高压蒸汽灭菌 20min。从高压灭菌器取出培养基时应轻轻旋动以使熔解的琼脂糖能均匀分布于整个培养基溶液中，应使培养基降温至50℃时，加入抗生素等不耐热的物质。为避免产生气泡，混匀培养基时应采取旋动的方式，然后可直接从烧瓶中倾出培养基铺制平板。90mm直径的培养皿约需30－50ml培养基，培养基完全凝结后，应倒置平皿并贮存于4℃备用。 2．琼脂糖凝胶的配制 根据所需凝胶的浓度秤取琼脂糖，加入相应电泳缓冲液中，用微波炉加热煮沸至琼脂糖完全溶解，加入适量 EB 混匀，适当冷却后倾入凝胶铸槽中，插入梳子，凝胶厚度不超过梳孔，如有气泡产生则用玻璃棒驱除，不能过早拔除梳子，应待凝胶完全凝结后才能拔除梳子。 3．P1、P2、P3的配制P1 的配制 在 800ml 去离子水中溶入 Tris 碱 6.06g，Na2EDTA·2H2O 3.72g，用 HCl 调整 pH 至 8.0，用去离子水调整容积至1升，每升P1内加入RNaseA100mg。 P2 的配制：在 950ml 去离子水中溶入 NaOH 8.0g，20％SDS 50ml，调整容积至 1 升。 P3 的配制：在 500ml 去离子水中溶入醋酸钾 294.5g，用冰醋酸调整 pH 值至 5.5，用去离子水调整容积至1升。 4．常用缓冲液 TE pH 7.4 10mmol/LTris·Cl (p