大脑杏仁核局部注射糖皮质激素对大鼠焦虑行为和学习记忆能力影响及其可能机制.pdfVIP

目 录 一、摘 要 中文论著摘要……………………………………………………………………l 英文论著摘要……………………………………………………………………5 二、英文缩略语………………………………………………………………………10 三、论文 前言………………………………………………………………………………11 日U舌………………………………………………………………………………ll 材料与方法………………………………………………………………………12 实验结果…………………………………………………………………………15 讨论………………………………………………………………………………2l 结论………………………………………………………………………………23 四、本研究创新性的自我评价………………………………………………………24 五、参考文献…………………………………………………………………………25 六、附录 综j丕………………………………………………………………………………29 致谓 ………………………………………………………………………………44 个人简介…………………………………………………………………………45 万方数据 ·中文论著摘要· 大脑杏仁核局部注射糖皮质激素对大鼠焦虑行为和学 习记忆能力的影响及其可能机制 刖 吾 激素。体内大多数组织存在糖皮质激素受体 glucocorticoid 关键的应激激素，它的作用广泛而复杂。临床上经常将GC用于抗炎，抗毒，抗过 敏和抗休克的治疗。然而临床调查显示，长期使用GC可以造成患者行为和认知 能力等中枢神经系统功能的改变。大量使用GC还可以引起失眠，情绪激动或抑 郁，记忆减退等症状，其相关机制目前还不清楚。 大量实验结果已经证实情绪调节以及与情绪相关的学习记忆功能是由大脑 杏仁核 amygdala 所产生的。长期大剂量应用GC会引起大脑杏仁核神经元发 生结构变化，如神经元树突网络重组，神经元再生减少等【l。5J。为了验证GC是否 通过直接作用于大脑杏仁核来改变机体的情绪调控和学习记忆功能，我们以大鼠 大脑杏仁核，通过旷场试验，高架十字迷宫实验和恐惧条件反射实验等行为学实 验方法来检测大鼠的行为有无改变。 derived factor， 此外，我们还探讨了脑原性神经营养因子 brain neurotrophic 调节细胞增殖、分化和存活的重要营养因子。它可以促进神经元树突增长，突触 形成，参与突触的可塑性的调节【6。141。有研究表明，杏仁核BDNF表达程度与焦 虑行为和恐惧记忆能力相关【15】。但是CORT对BDNF的表达情况有何影响仍然不 少；但是在相同的条件下大脑皮层BDNF表达却上调【17】。因此海马和大脑皮层中 BDNF的表达，可能受到不同的机制调控。而在大脑杏仁核中CORT对BDNF的 表达有何影响尚不清楚。为此我们应用免疫组化和ELISA等方法检测了局部注射 万方数据 CORT后，大脑杏仁核中BDNF的表达情况。 方 法 一、杏仁核插管手术过程 将大鼠全身麻醉后，置于脑立体定位仪上，暴露前囟和颅骨，定位标记杏仁 核。在标记过的杏仁核区域颅骨上钻孔，经钻孔处插入微量注射管。用牙科水泥将 微量注射管与颅骨粘合以加固。动物单笼饲养，恢复一周后进行实验。 二、杏仁核局部微量注射 u 11 11l。 双侧杏仁核微量注射皮质酮 4 l共21 或生理盐水2 g／u 三、开放旷场实验 将大鼠置于旷场的中心后开始进行摄像和计时。连续观察其运动情况5min， 记录运动速度，运动距离，休息时间，沿边运动距离，中央运动距离等指标。 四、高架十字迷宫实验 实验开始时，将大鼠放入中心区，面对开放臂。记录5min内动物进入闭合臂和 开放臂次数和停留时间。 五、恐惧条件反射实验 1 环境适应：在给药处置前1天将大鼠放入实验笼中，播放1000z的声音 20s，重复上述步骤累计5次。在整个实验过程中，实验者记录声音响起20s期间大 鼠的不动时间。 2 恐惧条件反射的建立：将给药处置后大鼠放入实验笼里，播放1000Hz 的声音20s 条件刺激 ，在声音结束前2s给予足底电击，足底电击与声音刺激同时 结束。记录声音响起20s期间大鼠的不动时间。重复上述步骤累计7次。在整个 实验过程中，实验者记录声音响起20s期间大鼠的不动时间。 2 万方数据 3 恐惧条件的消退：恐惧条件反射建立后1h，将大鼠从饲养笼放入实验笼 中，播放1000z的声音20s，但不伴随足底电击，记录20s内大鼠的不动时间重复 上述步骤累计15次。在整个实验过程中，实验者记录声音响起20s期间大鼠的不 动时间。 六、免疫荧光 将冰冻切片在4℃条件下用丙酮固定10min，加入山羊血清封闭液孵育1h， 7．4 充分漂洗后， 兔抗鼠B