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5.动物组织原代培养无菌接种技术
5.动物组织原代培养无菌接种技术 Made by lionchp 一 鼠肺组织原代培养 处死小鼠：颈椎脱臼，浸入75%酒精5秒 取鼠肺：从酒精中夹出小鼠，放入无菌操作盘上平皿中，用剪、镊解剖小白鼠，取出肺放入另一平皿中 转入超净工作台上操作：注意无菌操作意识 洗涤：用D-hanks或D-PBS洗肺2-3次 剪切：肺组织放入青霉素瓶中，用剪刀反 复剪切肺成1mm3小块 接种：用镊将组织块移入培养瓶（反放）， 用枪头将组织块均匀放置在培养瓶 下方的顶壁（因为反放） 翻转干固：一段时间后，将培养瓶翻转 （正放），加入适量D-hanks培 养液，加瓶盖，将培养瓶倾斜 放在37℃、5%CO2培养箱中培养 2-4h ▲继续培养：培养瓶翻转（反放，使培养液浸没贴顶壁的组织块），静置培养 二 鸡胚原代培养 消毒：从孵化机中取出9-12日龄的鸡胚蛋，大头朝上，放在超净工作台中，用酒精棉球消毒大头部分（气室） 取材：用镊子敲碎大头外壳，剥去壳膜，撕开尿囊膜、羊膜，夹取鸡胚入无菌平皿，去头、四肢、内脏 洗涤：D-hanks或PBS洗2-3次 剪切：鸡胚转入青霉素瓶中，眼科剪反复剪切成1mm3小块，加D-hanks8ml，转入离心管中，800r/min，2min，去上清（去杂，留下组织小块） 消化：离心管中加0.25%胰酶4ml，37℃水浴30min（每5min摇一下） 终止消化：往离心管中加4ml含血清RPMI1640培养液终止消化（血清可消耗胰酶） 过滤：用150目网筛，收集滤液于平皿，再将平皿中滤液转入另一离心管，1000r/min，5min，去上清（留细胞沉淀） 制备细胞悬液：离心管中加5mlRPMI1640，吹打均匀 细胞计数：血细胞计数板显微计数 细胞悬液移入培养瓶培养：37 ℃，5%CO2培养箱中 ※接种技术总结 取材：处死方法、解剖 除杂：水浴、离心、加试剂、网筛、润洗 剪切：青霉素瓶中用剪刀剪成1mm3小组织块
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