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转染步骤
DNA转染步骤
1 转染前一天接种细胞于6孔板，0.5-2×105每孔，2ml无抗生素培养基每孔，第二天转染时细胞达到90-95%每孔。
2 转染前半小时换Opti-MEM无血清培养基1.5ml。
3 A液：DNA 5ug 加入245ul Opti-MEM无血清培养基，轻轻混匀。
4 B液：脂质体使用前轻轻混匀，脂质体10ul 加入245ul Opti-MEM无血清培养基，轻轻混匀，室温静止5min。
5 B液加入A液，用枪轻轻混匀，室温静止20min。
6 将混合液均匀分散慢慢滴加到6孔板细胞中，边滴加变前后左右十字交叉摇晃。
7 孵箱37℃培养48h（转染时间待定）。
8 第二天看细胞状态来决定是否换液。
9 同时设立细胞对照组，空白转染组。 siRNA转染步骤
1 转染前一天接种细胞于6孔板，2ml无抗生素培养基每孔，第二天转染时细胞达到30-50%每孔。
2 转染前半小时换Opti-MEM无血清培养基1.5ml。
3 A液：siRNA 5ul（共100pmol）加入245ul Opti-MEM无血清培养基，轻轻混匀。（siRNA按照说明书稀释）
4 B液：脂质体使用前轻轻混匀，脂质体10ul 加入245ul Opti-MEM无血清培养基，轻轻混匀，室温静止5min。
5 B液加入A液，用枪轻轻混匀，室温静止20min。
6 将混合液均匀分散慢慢滴加到6孔板细胞中，边滴加变前后左右十字交叉摇晃。
7 孵箱37℃培养48h（转染时间待定）。
8 第二天看细胞状态来决定是否换液。
9 同时设立细胞对照组，空白转染组。
实验室通常用细胞培养瓶与孔板
瓶皿 培养液容积 底面积 细胞产量 96孔板 0.2ml 32mm2 105 24孔板 1ml 2cm2 5×105 12孔板 1ml 4.5 cm2 106 6孔板 2.5ml 9.6 cm2 2.5×106 30mm瓶皿 2.0ml 6.9 cm2 1.7×106 35mm瓶皿 3.0ml 8.0 cm2 2.0×106 50 mm瓶皿 4.0ml 17.5 cm2 4.4×106 60mm瓶皿 5.0ml 21 cm2 5.2×106 90 mm瓶皿 10ml 49 cm2 12.2×106 25ml培养瓶 4ml 12.5 cm2 3×106 100ml培养瓶 10ml 30 cm2 6×106 250ml培养瓶 15ml 78 cm2 2×107 实验室通常用细胞培养瓶与孔板
瓶皿 培养液容积 底面积 细胞产量 96孔板 0.2ml 32mm2 105 24孔板 1ml 2cm2 5×105 12孔板 1ml 4.5 cm2 106 6孔板 2.5ml 9.6 cm2 2.5×106 30mm瓶皿 2.0ml 6.9 cm2 1.7×106 35mm瓶皿 3.0ml 8.0 cm2 2.0×106 50 mm瓶皿 4.0ml 17.5 cm2 4.4×106 60mm瓶皿 5.0ml 21 cm2 5.2×106 90 mm瓶皿 10ml 49 cm2 12.2×106 25ml培养瓶 4ml 12.5 cm2 3×106 100ml培养瓶 10ml 30 cm2 6×106 250ml培养瓶 15ml 78 cm2 2×107
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