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- 2016-08-04 发布于贵州
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第1讲 基因工程和细胞工程
[考纲要求] 1.基因工程的诞生(A)。2.基因工程的原理及技术(A)。3.基因工程的应用(B)。4.蛋白质工程(A)。5.植物的组织培养(B)。6.动物的细胞培养与体细胞克隆(A)。7.细胞融合与单克隆抗体(A)。
[构建网络] 考点一 基因工程
1.基因工程的基本工具
限制酶 DNA连接酶 载体 作用 切割目的基因和载体 拼接DNA片段,形成重组DNA分子 携带目的基因进入受体细胞 作用
部位 两核苷酸的脱氧核糖与磷酸间形成的磷酸二酯键 作用特
点(条件) (1)识别特定的核苷酸序列;
(2)在特定位点上切割DNA分子 (1)E·coliDNA连接酶只能连接黏性末端;
(2)T4DNA连接酶能连接黏性末端和平末端 (1)能在宿主细胞内稳定存在并大量复制;
(2)有一个至多个限制酶切割位点;
(3)具有特殊的标记基因 2.基因工程的操作程序
(1)目的基因的获取
①从基因文库中获取。
②利用PCR技术扩增:其实质是在体外对目的基因进行大量复制。
③用化学方法人工合成
a.对于核苷酸序列已知的直接人工合成。
b.可通过反转录法获取,即mRNA逆转录酶,单链DNADNA聚合酶,双链DNA。
(2)基因表达载体的构建
①基因表达载体的组成:目的基因+启动子+终止子+标记基因+复制原点。
②基因表达载体的构建方法
(3)将目的基因导
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