分子生物学第9次课11周解析.ppt

正控制系统和负控制系统 2 正控制系统： 没有调节蛋白质存在时基因关闭,加入这种调节蛋白质后基因活性被开启 诱导蛋白 1951年，Monod与Jacob合作，发现两对基因： Z基因：与合成β-半乳糖苷酶有关； I基因：决定细胞对诱导物的反应。 Szilard：I基因决定阻遏物的合成，当阻遏物存在时，酶无法合成，只有有诱导物存在，才能去掉该阻遏物。 Jacob：结构基因旁有开关基因（操纵基因），阻遏物通过与开关基因的结合，控制结构基因的表达。 乳糖操纵元结构 操纵元是一种完整的具有特定功能的细菌基因表达和调节的单位，包括调节基因，操纵位点，结构基因，组成一个控制单元 结构基因：产生mRNA,合成蛋白质 操纵位点 promotor,operator：启动子结合位点 调节基因：产生调节蛋白（与操纵位点结合） →结构基因不转录 诱导物存在时，可与阻遏蛋白结合 →结构基因转录 7.1.2 酶的诱导现象 分解底物的酶只有在底物存在时才出现！ 无乳糖时，几个B-gal/cell 加入乳糖时，5000个 再去掉乳糖，lac mRNA下降 乳糖能激发lac mRNA的合成 乳糖的诱导作用是由酶前体转化而来，还是诱导新酶合成？ 培养基（35S-aa, 无乳糖）→ E.coli繁殖→ 培养基（无35S -aa, 加入乳糖） → β-gal(无35S) 7.1.3 调控机理 1 调控区结构 lacI, 1045bp，独立Pi P, 82bp，－82～＋1 O, 35bp，－7～＋28 lacZYA 体外结合竞争实验: 阻遏物＋RNA pol, off RNA pol＋阻遏物， on 2. 阻遏状态 3 诱导状态 4 诱导物不是乳糖 gratuitous inducer  安慰诱导物 义务诱导物 可诱导半乳糖苷酶产生，但不是其底物 IPTG，异丙基半乳糖苷 TMG ，巯甲基半乳糖苷 ONPG, O-硝基半乳糖苷 7.1.4 阻遏蛋白的作用机制 1 阻遏蛋白结构 38KD，4 聚体， 一个亚基结合一个IPTG分子 lacI 组成型转录 Pi 弱启动子， 5－10个／cell 具有二重性 阻止转录（与lacO结合） 开始转录（与诱导物结合） 3 阻遏蛋白对RNA pol功能的影响 阻遏蛋白和RNA pol可同时与DNA结合 结合着的RNA pol不能转录. 但加入诱导物后, 释放出阻遏蛋白, 变为开放型启动子复合物. 阻遏蛋白实际上使RNA pol贮存在启动子上。 7.1.5 lac operon的正调控1 代谢物阻遏效应 实验，在lac＋Glu培养基上 E.coli只利用G，只有G 耗尽时，才会利用lac 葡萄糖抑制lac mRNA的转录： 可阻止诱导物引起的阻遏物失活效应 仅去掉阻遏物并不能启动lac基因表达,有其它因素参与 葡萄糖对lac操纵元表达的抑制是间接的 乳糖的降解是通过cAMP与 CAP结合起作用的 cAMP:环化腺苷酸 2 CAP结合位点 CAP为二聚体， 45KD ，被cAMP激活 结合位点～22bp I -70 ~ -50 II -50 ~ -40 由于序列的差异，使不同基因受cAMP激活的水平不同 3 CAP的结合对DNA构型的影响 DNA弯曲 弯曲点位于CAP结合位点二重对称的中心 弯曲使CAP能与启动子上的RNA pol 接触 4 CAP对转录的影响 （1）CAP结合位点与转录起始点的位置 CAP与转录起始点的距离，相距数个整双螺旋 CAP结合位点在启动子的上下游，都能发挥作用 （2）基因转录对cAMP—CAP系统的依赖性， 与启动子本身的效率有关 （3） CAP激活转录的方式 CAP直接作用于RNA pol α亚基 缺失RNA pol α亚基的—C末端