RNA干涉技术要点.pptVIP

This years (2006) Nobel Prize in Physiology or Medicine is shared by Professor Andrew Z. Fire at Stanford University, California, USA, and Professor Craig C. Mello at the University of Massachusetts Medical School in Worcester, USA. They receive the prize for their discovery that double-stranded RNA triggers suppression of gene activity in a homology-dependent manner, a process named RNA interference (RNAi). ? RdRP一般只对靶mRNA起作用，这种在RNAi过程中对靶m RNA 的特异性扩增作用有助于增强RNAi的特异性基因监视功能，每个细胞只需要少量dsRNA却能完全关闭相应基因表达，RNAi过程具有生物催化反应的基本动力学特征。 四、RNAi的生物学意义和应用前景 ? 抑制不重要或有害基因表达对细胞及有机体正常功能的发挥和维持至关重要。RNAi是植物、线虫、真菌、昆虫、原生动物以及动物的一种强有力的基因表达抑制途径，在生物体的发生发育及防御系统的构成等方面具有十分重要的作用。 生物学意义 ? 转座子封闭（transposon silencing ） 转座子的重要特征之一是具有反向重复序列，该序列可以产生dsRNA发夹，启动RNAi，从而抑制转座酶蛋白的产生和转座子的移动，有利于遗传稳定和防止遗传损害。RNAi必需基因Mut-6突变后导致转座子活动大大增强。 ? 抗病毒 dsRNA出现在许多病毒感染的细胞内，诱发RNAi，封闭病毒生存和繁殖所必需的基因，产生抗病毒效应。对危及正常基因组完整的因素，如高负荷病毒和自私DNA（selfish DNA), RNAi可能是整个防御网络的重要组成部分。 ? 调控基因表达 从低等生物到高等生物均存在RNAi现象，说明RNAi可能是生物发育和基因表达调控中的一种策略，它能适当地关闭相关基因以适应不同时段细胞的需要。 应用前景 ? 功能基因组学的新工具 a. 功能基因组学需要建立有效、经济的分析基因功能的技术。RNAi的特异性和有效性成为研究线虫、果蝇等低等动物已知序列基因功能的理想工具。 b. 已知序列的基因，通过阻抑这一特异基因的表达而出现功能或个体表型的改变，进而得到基因与其功能的相对应联系，称为逆基因分析。 RNAi可实现同一基因家族的多个基因同时敲除，与传统基因敲除技术相比，RNAi具有投入少，周期短，操作简单等优势。 在RNAi发现之前，用生化或遗传方法对线虫基因组中8%基因（1，572个基因）的功能进行了研究，而2000年8月至2001年8月的一年时间内，采用RNAi对线虫基因组功能进行大规模研究，已敲除了线虫基因组中超过1/3的基因（6，275个）。采用RNAi将可得到线虫、果蝇，甚至小鼠的绝大部分基因的敲除表型，将是功能基因组学研究的巨大突破。 ? 在转基因动植物中的应用 找到与RNAi相关的必需基因，获得其突变体，利用该突变体制作高水平表达外源基因的转基因动植物，得到稳定高效表达基因工程所需各种蛋白的转基因生物。 特异性抑制病毒增殖必须基因的表达，得到抗病毒动植物，也可以利用这一机制，产生改变开花期、果实储藏期的转基因植物。 ? 研究信号传导通路的新途径 RNAi可以较容易确定复杂的信号传导途径中不同基因的上下游关系，Clemensy等应用RNAi研究果蝇细胞中胰岛素信号通路，证实DACK是DSH3PX1磷酸化的上游激酶。 通过特异性抑制肿瘤细胞内癌基因的表达，或者特异性抑制肿瘤细胞内细胞增殖必需的基因表达，从而治疗肿瘤。肿瘤是多个基因相互作用的基因网络调控的结果，传统技术诱发的单一癌基因的阻断不可能完全抑制或逆转肿瘤的生长，而RNAi可以利用同一基因家族的多个基因具有同源性很高的保守序列这一特性，设计针对这一区段序列的dsRNA，只注射一种dsRNA即可以产生多个基因同时剔除的表现，也可同时注射多种dsRNA将不同基因同时剔除。 ? 开展基因治疗的新策略 利用基因沉默机制，抑制病毒浸染、增殖必需的关键基因的表达，治疗病毒引起的人类疾病 人工合成的dsRNA寡聚