暗视野显微镜要点.pptVIP

细胞生物学实验 一、相差显微镜的结构原理及应用 二、偏光、暗视野显微镜的原理及应用 三、荧光显微镜的原理及应用 四、激光共聚焦扫描显微镜的原理及应用 五、细胞膜渗透性测定 六、液泡系活体染色及观察 七、线粒体活体染色及观察 八、细胞原生质体制备以及叶绿体的原位观察 实验二、偏光、暗视野显微镜的原理及应用 暗视野显微镜-----装有暗视野聚光器的显微镜，由于采取特殊的照明方式，能够在暗背景上呈现明亮的像，分辨率较高，小于5nm，比普通光镜高40倍，可以用来观察未染色的活体微生物或者胶体颗粒。 以丁达尔效应为基础，常用于微生物，胶体化学，观察单细胞有机体，硅藻，放线虫类，细菌等具有线性结构的物体：鞭毛、纤维。浮游生物，悬浮细胞，精子，梅毒螺旋体等，不适合观察染色的标本 只能看到物体的存在和应用，看不到内部的细微结构 （一）原理 丁达尔效应-----光通过浑浊的媒质（如烟雾、悬浮液、乳状液）时，从入射光的垂直方向可以观察到胶体里出现的一条光亮的通路，是浑浊媒质所呈现出的光的强烈散射现象。 三个特点： 1、斜射照明，使背景为暗色，物体发亮 2、观察到的光为非直射光，是散射光 3、非物体本身，而是它的衍射图像，因此它的应用受到限制 （二）结构： 结构特点: 使用中央遮光板或暗视野聚光器（常用的是抛物面聚光器），使光源的中央光束被阻挡。不能由下而上地通过标本进入物镜。从而使光线改变途径，倾斜地照射在观察的标本上，标本遇光发生反射或散射，散射的光线投入物镜内，因而整个视野是黑暗的。 （四）注意事项： 1、物镜NA聚光器NA 2、要调中 3、 载玻片1mm标准，盖玻片0.17mm标准且干净无痕 4、标本不能太厚、太密，不适于染色标本 试剂和器材： 蒸馏水 暗视野显微镜 载玻片 盖玻片 牙签 滤纸条 指甲油 * * （三）操作： 1、样品制备：蒸馏水一小滴→ 载玻片 →牙签取口腔上皮细胞→混匀→盖上盖玻片 → 吸去多余水→ 封片 2、装暗视野聚光器，若用油浸系时，需在载玻片与聚光器之间滴油 3、标本置于载物台上 ，用10倍物镜聚焦 升高聚光器直至出现一个清晰的光点，将其调中 4、换用高倍时，需注意其数值孔径应低于聚光器的数值孔径（N.A.） 实验报告： 1、为什么物镜NA应小于聚光器NA？ 2、为什么要把聚光器调到视野中只有一个清晰光点，并且要把它调到中央？ 3、正确的操作步骤是什么？你在实际操作过程中遇到了哪些具体问题？如何解决的？ *