第二节工业微生物菌种选育要点.ppt

第二节 工业微生物菌种选育 工业微生物菌种获得渠道 1、从微生物菌种保藏机构购买菌种； 2、从自然界或现有菌种中分离筛选菌种； 3、对筛选出的菌种进行改良从而获得新种。 一、微生物菌种保藏机构简介 1、国内主要菌种保藏机构 1979年国家科委主持成立了普通、农业、工业、兽医、林业、医学、药用7个国家专业微生物菌种保藏中心。 目前中国在世界菌种保藏中心联合会注册的菌种保藏中心达20个。除此之外，许多其他的科研或生产机构也保藏有大量微生物菌种。目前我国保藏的10万株微生物菌种保藏在近30多个单位。 （1）中国工业微生物菌种保藏管理中心（CICC）：开展工业微生物菌种的保藏、销售、分离、鉴定、培训与咨询五个方面工作。还编辑出版了《中国工业微生物菌种目录》并备有几十种国际菌种保藏联合会成员机构的菌种目录以供查询。 （2）中国科学院典型培养物保藏委员会：下设9个库，中国普通微生物爆仓管理中心；中国病毒保藏中心；细胞库；昆明细胞库；基因库；植物离体种质库；稀有濒危特有植物种质库；海洋生物种质库及淡水藻种库。此外，还成立信息网络中心。 2.国外主要菌种保藏机构 （1）国际菌种保藏联合会（WFCC） （2）美国典型微生物菌种保藏中心（ATCC） （3）美国农业研究菌种保藏中心（NRRL） （4）日本技术评价研究所生物资源中心（NBRC） （5）荷兰微生物菌种 保藏中心（CBS） （6）德国微生物菌种 保藏中心（DSMZ） （7）英国国家典型微生物菌种 保藏中心（NCTC） 二、从自然界或现有菌种中分离筛选菌种 从自然界分离微生物菌种是最初获得工业微生物菌种的主要方式。 从土壤中分离微生物菌种是典型分离方式之一。 但土壤中种类繁杂，要想获得目标菌种将花费大量时间和资金。 如美国辉瑞制药有限公司为了获得一个广谱抗生素，花费了数百万美元；美国默沙东公司分离了10000株菌株，才获得1株有用的微生物；美国礼来公司花了10年时间从40万株微生物发现了3个新抗生素菌株。——可见不经济。 从自然界直接分离筛选菌种的步骤 1.采样： （1）选择采样地点 中性偏碱：细菌和放线菌多 酸性红土壤及森林土壤：霉菌多 果园、菜园、野果生长区（富含碳水化合物）和沼泽池：酵母和霉菌多。 （2）确定采样时间 秋初好：温度适中，雨量不多。 夏季或冬季土壤微生物存活量少，暴雨后显著减少。 （3）采样 5cm~15cm处取土。放在牛皮纸袋或玻璃屏或聚乙烯袋中，标明样品种类、采集日期、地点以及采集地点的地理、生态参数等 采集的样品应及时处理，暂不处理应放在4℃保存。 2.增殖培养： 认为 地加入一定的限制因素，以使所需的微生物增殖后在数量上占绝对优势。 （1）控制培养基中碳源的种类 可选定糖、淀粉、纤维素等，以其中一种作为唯一碳源，让其中一种生长，其他死亡。 （2）添加某些抑制因子或促进因子 培养基中加抗真菌剂，可以抑制真菌生长；培养基中加入1~5ml天然浸出汁作为促进因子，可以分离出不同的放线菌。 （3）控制培养条件：如分离梭状芽胞杆菌，可利用该菌的厌氧特性，控制好氧菌就不易生长而受到抑制，只有艳阳可以优势生长。 3.纯种分离及培养 （1）稀释分离法 （2）划线分离法 （3）组织分离法 4.性能鉴定 这种从自然界分离得到的纯种称为野生型菌株，它只是筛选的第一步，所得到的菌株是否具有实用价值，能否作为生产菌株，还必须通过三角瓶进行小型发酵实验。 如果得到的野生型菌株产量偏低，达不到生产要求，仍可以作为保留作为菌种选育的出发菌株。 三、微生物菌种的自然选育 分离筛选获得菌种，不能直接进行实际生产，要经过选育。 选育方法：自然选育、诱变选育、杂交选育、原生质体融合、基因工程。 自然选育：不经过人工处理，利用菌种的自发突变，从而选育出优良菌种的过程。 具有实践经验和善于观察的工作人员根据自发突变而出现的菌种形状变化，选育出优良菌种。 例如谷氨酸发酵过程中，人们从被噬菌体污染的发酵液中分理处抗噬菌体菌种；抗生素发酵生产中，从某一批次高产的发酵液中取样进行分离，往往得到较稳定的高产菌株。 自发突变几率低。 四、微生物菌种的诱变选育 （一）诱变育种的一般步骤 诱变育种：是指利用人工的方法处理微生物，使它们发生突变，再从中筛选出符合要求的突变菌株，供生产和科学实验用。 意义重大，应用广泛。 具有操作简便、速度快和收获大的优点。 步骤： 1.出发菌种选择 2.诱变处理 3.筛选突变株。 1.选择出发菌株 出发菌株是指用于诱变的原始菌种。 选择原则：菌种对诱变剂的敏感性强、变异幅度大、产量高。 获得途径： （1）从自然界的土样或水样中分离出来的野生型菌种； （2）生产中正在使用的菌种； （3）从菌种保藏机构购买 2.同步培养 培养中的细胞不处于同一生长阶段，它们的生理状态和代谢活动也不完全一样。