第二十四章病毒与细胞的相互作用要点.ppt

兽 医 微 生 物 学（Veterinary Microbiology） 肖书奇 动物医学院预防兽医学系 E-mail：xiaoshuqi@nwsuaf.edu.cn 电话第四章 病毒与细胞间的相互作用 第一节 病毒的细胞培养 第二节 病毒与细胞的相互作用 第一节 病毒的细胞培养 病毒是严格的细胞内寄生微生物，培养病毒必须使用细胞。根据病毒的不同选用敏感动物（动物接种）、鸡胚（鸡胚接种）或离体细胞进行分离培养（细胞培养）。 一、动物接种 接种后通常以动物发病、死亡作为感染的指标。 按病毒侵袭部位不同选择适当的接种途径。嗜神经病毒接种在小鼠的脑内。痘苗病毒和单纯疱疹病毒接种于家兔角膜。 动物接种的优缺点： 优点：（1）不需要复杂的仪器设备； （2）技术简单； （3）易成功 缺点：（1）个体差异大 （2）价格昂贵 （3）数量有限 （4）需要隔离畜舍 二、鸡胚接种 一种比较经济简便的方法。 卵壳 壳膜 接种途径 绒毛尿囊膜接种 9-13日龄尿囊腔接种 9-10 日龄 卵黄囊接种 6-8日龄 羊膜腔接种 10日龄 脑内接种 10日龄 1气室 2卵壳 3卵黄囊 4卵白 5 尿囊腔 6绒毛尿囊 7胚胎 8羊水腔 9胚胎外腔 鸡胚接种的优缺点： 优点：技术简单、来源充沛、价格低廉、数量可大， 不需特殊设备 缺点：很多病毒不能适应，主要是哺乳动物的病毒。 细胞培养(cell culture)是指利用机械、酶或化学方法使动物组织或传代细胞分散成单个乃至2～4个细胞团悬液进行培养。 三、细胞培养 每个细胞生理特性基本一致，对病毒易感性相等 无个体差异，准确性和重复性好 可严格执行无菌操作 细胞培养本身就能显示病毒的生长特征 应用空斑技术可进行病毒的克隆化 优点： 根据细胞来源、染色体特征及传代次数，可分为三种类型： 原代细胞：动物组织经胰蛋白酶消化处理，使细胞分散而得到的细胞。 二倍体细胞：将长成单层的原代细胞消化分散成单个细胞，继续培养传代，其染色体数与原代细胞一样，保持其二倍染色体数目的细胞，称为二倍体细胞。 传代细胞：能在体外持续增殖传代的细胞，大多数由癌细胞或二倍体细胞突变而成。 （一）细胞的类型 （二）细胞培养的方法 静置培养：实验室常用。细胞悬液装瓶，5%CO2温箱静置培养，细胞沉降并贴附在玻面上生长分裂，最后长成单层。 旋转培养：大规模生产疫苗。细胞在玻瓶内生长时，玻瓶不断缓慢旋转，细胞贴附于玻瓶四周，长成单层。 悬浮培养 微载体培养：悬浮、微载体 第二节 病毒与细胞的相互作用 杀细胞感染 非杀细胞感染 引致持续感染，对细胞代谢无影响。 RNA干扰 产生干扰素 生产性感染（productive）：病毒感染后能产生完整的子代病毒颗粒。宿主细胞感染病毒发生的变化可能是细胞死亡或细胞转化。 非生产性感染（nonproductive）或称顿挫感染（abortive infection）:病毒感染后不形成完整的病毒颗粒。 持续性感染（persistent infection）:持续长时间的感染，感染过程中不形成感染性的病毒颗粒。 病毒在宿主易感细胞内增殖造成细胞损伤与死亡，这种感染称为杀细胞性变化。 一、病毒引致的杀细胞变化 杀细胞变化 由病毒感染导致的细胞损伤。CPE能在光学显微镜下观察。 ①细胞圆缩，如痘病毒和呼肠孤病毒等； ②细胞聚合，如腺病毒； ③细胞融合形成合胞体，如副粘病毒和疱疹病毒； ④有些病毒能形成包涵体。 （一）细胞病变效应(cytopathic effect,CPE) CPE观察 CPE观察 CPE观察 正常细胞 CPE CPE观察 正常单层A72细胞 接种CCV后出现细胞拉网 的的单层A72细胞 CPE观察 CPE观察 正常单层A72细胞 接种犬冠状病毒（CCV）后形成合胞体的的单层A72细胞 合胞体（syncytia）是病毒感染后导致感染细胞及相邻细胞细胞膜融合的产物，表现为若干细胞的相邻细胞膜消失，成为多核巨细胞。 可以使病毒从感染的细胞直接进入相邻的正常细胞，有利于病毒在细胞间的扩散。 病毒引致的细胞凋亡和坏死 细胞死亡（cell death）:病毒的繁殖、产物等直接引起细胞的死亡。 细胞凋亡（cell apoptosis）是病毒感染引起细胞的生理性死亡，即程序性死亡。 由于病毒的杀细胞感染导致的死亡，总是发生在病毒复制完成之后。病毒抗凋