第二章生物分离和提取技术要点.ppt

第二章 生物产品分离提取技术 北京化工大学 谭天伟教授 生物产品的分离纯化技术 2.1 生物产品的分离纯化 2.2 预处理和絮凝技术 2.3 细胞破碎技术 2.4 双水相萃取技术 2.5 膨胀床技术 2.6 膜分离 2.7 沉淀技术 2.1 生物产品的分离纯化技术 4 1、胞外产物 离心或过滤——固液分离——转入液相 2、胞内产物： 收集细胞——细胞破碎或整体细胞萃取——目的产物释放——转入液相——分离细胞碎片 3、 产物为细胞 离心或过滤——固相干燥——得到菌体 分离细胞、菌体和其他悬浮颗粒（如细胞碎片、核酸以及蛋白质的沉淀物） 固液分离目的： 2.2 发酵液预处理和絮凝 预处理: 高价无机离子的去除 蛋白质的去除 絮凝 固液分离技术 为什么? 7 发酵液杂质对分离提取影响最大的是： 高价无机离子和水溶性杂蛋白 高价无机离子——影响离子交换树脂对目标物的吸附 水溶性杂蛋白 影响离子交换和大网格树脂的吸附能力 有机溶剂提取和双水相萃取时，产生乳化，难以分离 在常规过滤或膜过滤时，使滤速下降，污染滤膜 8 发酵液的特点： 1、多为悬浮液，粘度大，不易过滤 2、滤液浑浊、滤速极慢（菌体自溶，核酸、蛋白 质及其他有机粘性物质） 3、目标产物在发酵液中的浓度通常较低； 4、含有高价无机离子（Ca2+ , Mg2+, Fe3+ ，成分复 杂（菌丝体、菌种代谢物和剩余培养基会） 预处理是生化物质分离纯化过程中必不可少的首要步骤 9 例如：在四环类抗生素废液中，加入硫酸铅，60℃下反应生成草酸铅，草酸铅在90～95℃下用硫酸分解，再经过过滤、冷却、结晶操作后就可以回收草酸。 1、草酸可酸化发酵液，改变发酵液的胶体状态，有助于 产物转入液相。 2、反应生成的草酸钙还能促使蛋白质凝固，提高滤液质 量。 3、在沉淀钙离子的同时，草酸还会与发酵液中的镁离子 形成草酸镁，去除部分镁离子。 4、草酸的价格较高，注意回收利用以降低成本。 钙离子的去除 ——加入草酸或草酸钠 10 镁离子的去除 ——与镁离子形成可溶性络合物，即可消除对离子交换树脂的影响： Na5P3O10 + Mg 2+ = MgNa3P3O10 + 2Na+ ——用磷酸盐处理，也能大大降低发酵液中钙离子和镁离子的浓度。此法可用于环丝氨酸的提炼。 ——加入三聚磷酸钠 铁离子的去除 ——使其形成普鲁士兰沉淀 3K4Fe(CN)6 + 4Fe 3+ = Fe4[Fe(CN)6]3↓+ 12K+ ——加入黄血盐 11 水溶性蛋白质的特征： 1、以胶体状态存在于发酵液中，其稳定性与所带电荷 有关； 2、两性物质，存在等电点，等电点多在酸性范围内。 在酸性溶液中带正电，在碱性溶液中带负电； 3、加热易变形，可使溶液粘度降低，加快过滤速度 水溶性蛋白质的去除 根据蛋白质的特性，有几种去除方法？ 发酵液的预处理，从根本上说，是如何使可溶性杂蛋白形成沉淀，以便随固形物一同除去的过程 12 水溶性蛋白质溶液是胶体体系，分子与水有很大的亲和力，所以又是亲水胶体。它的溶解度与其分子高度水化有关，所以溶解的蛋白质分子周围有水化层。水化层是胶体体系稳定的必要条件之一。如果向胶体系统中加入电解质，随着体系的离子强度增大，蛋白质表面的双电层厚度就会降低，静电排斥作用减弱，同时也使得蛋白质某些疏水区的水化层脱落，疏水区域暴露，容易发生凝聚，从而沉淀。水溶液中的蛋白质，其溶解度一般在生理离子强度范围内（0.15~0.2mol/kg）最大，低于或高于此范围时均降低。 1、盐析法 原理 13 1、蛋白质的相对分子量和立体结构，结构不对称的高相对分子量蛋白质所需的盐浓度较低； 2、对于特定的蛋白质，主要影响因素为无机盐的种类、浓度、温度和pH值。 离子半径小而带电荷较多的阴离子的盐析效果比较好，含高价离子比低价型（1-1）盐的效果好。 盐析操作的温度和pH值。 高离子强度下，升高温度，蛋白质溶解度降低； pH值在接近蛋白质等电点时，有利于盐析 盐的种类，硫酸铵、硫酸钠、氯化钠 14 2、等电点沉淀法 蛋白质通式： ——一种两性电解质 羧酸解离时产生H+，使蛋白质具有弱酸性： 蛋白质的氨基能与H+结合成R－NH3+，使其具有弱碱性： 15 蛋白质的等电点： 当溶液处于某一pH值时，蛋白质质点所带的净电荷恰好为零，此时的pH值就称为蛋白质的等电点 等电点状态时，蛋白质之间的静电排斥力最小，此时蛋白质质点迅速结合成聚集体，沉淀极易析出。 在抗生素的生产过程中，一般将发酵液的pH值调至2~3的偏酸性范围