分解纤维素的微生物的分离(上课用)要点.ppt

知识回顾： 培养基按照功能可以分为几类；说出下列培养基可以选择哪一类微生物；说出理由； 在土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验 中，具体的操作流程： 　　阅读课本27页基础知识部分第一、二段，回答下列问题： 1. 纤维素在生物圈的分布状况？ 　　纤维素是地球上含量最丰富的多糖类物质。植物的根、茎、叶等器官都含有大量的纤维素。其中棉花是自然界中纤维素含量最高的天然产物。 一、纤维素和纤维素酶 纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即C1酶、 CX酶和葡萄糖苷酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。 纤维素 纤维二糖 葡萄糖 C1酶 Cx酶 葡萄糖苷酶 2.纤维素酶的组成及作用？ 在一支试管中添加纤维素酶， 另一支试管不添加纤维素酶； 实验分析：P27-28的小实验是如何构成对照的？ 滤纸崩溃法 （2）纤维素分解菌的筛选(学生阅读P28回答如下问题: 1、筛选纤维素分解菌的方法______________。该方法可以通过________反应直接筛选。 刚果红染色法 颜色 2、其原理是：刚果红可以与纤维素形成____________，当纤维素被_________分解后， 红色复合物无法形成，出现以_____________ 为中心的________，可以通过___________________________ 来筛选纤维素分解菌。 红色复合物 纤维素酶 纤维素分解菌 透明圈 是否产生透明圈 可根据是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌 (二)、实验设计(根据P28-29思考并回答:) 土壤取样 选择培养 梯度稀释 将样品涂布到鉴别培养基 挑选菌落 什么样的环境取样? ① 培养的目的? ②选择培养基的特点? 挑选什么样的菌落? ①鉴别培养基的特点? ②如何鉴别? 根据：微生物对生存环境的要求，到相应环境中去找； 目的：增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够从样品中分离到所需要的微生物； 刚果红染色法 1、纤维素分解菌选择培养基属于______（固体、液体）培养基，原因__________ 【资料二】选择培养 阅读资料二“选择培养基”，回答以下几问题： 液体 没有添加琼脂 2、该培养基对微生物_____（具有，不具有）选择作用。如果具有，其选择机制是: 具有 以纤维素粉为唯一碳源，能分解纤维素的微生物可以大量繁殖； 若设置一个对照实验说明选择培养的作用，应控制的变量是将__________改为_________。 3、你能否设计一个对照实验，说明选择培养基的作用？ 葡萄糖 纤维素粉 培养基组成 提供的主要营养物质 CMC-Na 5-10g 碳源 酵母膏 1g 碳源、氮源、生长因子 KH2PO4 0.25g 无机盐 土豆汁 100mL 碳源、生长因子 琼脂 15g 凝固剂 上述物质溶解后，加蒸馏水定容至1000mL 氢元素、氧元素 鉴别纤维素分解菌的培养基 (水溶性羧甲基纤维素钠) 【资料三】刚果红染色法 方法一：先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应. 方法二：在倒平板时就加入刚果红. 染色法 优点 缺点 方法一 方法二 颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用 操作繁琐，刚果红会使菌落之间发生混杂 操作简便，不存在菌落混杂问题 产生淀粉酶的微生物也产生模糊透明圈，有些微生物能降解色素，形成明显的透明圈。 思考：这两种方法各有哪些优点与不足 挑选产生透明圈的菌落 挑取产生明显的透明圈的菌落，一般即为分解纤维素的菌落。 接种到纤维素分解菌的选择培养基上，在300C－ 370C培养，可获得纯培养。 三、结果分析与评价 1.培养基的制作是否合格以及选择培养基是否筛选出菌落 对照的培养基在培养过程中没有菌落生长则说明培养基制作合格。 如果观察到产生透明圈的菌落，则说明可能获得了分解纤维素的微生物。 为了确定分离得到的是纤维素分解菌，还需要进行_____________实验，纤维素酶的发酵方法有______ 发酵和______ 发酵。纤维素酶测定方法是对纤维素酶分解滤纸等纤维素所产生的________ 含量进行定量测定。 发酵产纤维素酶 液体 固体 葡萄糖 四、课题延伸 实验视频 分解纤维素的微生物的分离 纤维素酶 种类、作用、催化 刚果红染色 筛选原理 实验设计 土壤取样 选择培养 涂布培养 纯化培养 前置染色法 后置染色法 富含纤维素土壤 增大分解菌含量 染色鉴别 分离出分解菌 课堂总结 课堂练习： 1.下列关于纤维素酶的说法，错误的是 A. 纤维素酶是一种复合酶，至少包括三种 B. 纤维素酶可把纤维素分解成葡