分子生物学电子教案第八章要点.doc

第八章 蛋白质的翻译 1．课程教学内容 (1) 遗传密码 (2) 蛋白质的合成 (3) 蛋白质合成的调节 (4) 蛋白质合成后的运输 (5) 蛋白质的折叠 2．课程重点、难点 蛋白质合成的生物学过程、蛋白质合成后的运输、蛋白质的折叠。 3．课程教学要求 （1）掌握和理解细菌和真核生物蛋白质的和成起始及两者之间的异同； （2）了解蛋白质的运输和修饰的机制和特点，分子伴侣的作用。 ? 蛋白质是生命活动的重要物质基础，需要不断地进行代谢和更新，因此细胞内利用20种氨基酸进行蛋白质合成便成了生命现象的主要内容。细胞内每个蛋白质分子的生物合成都受细胞内DNA指导，但是贮存遗传信息的DNA并非蛋白质合成的直接模板，它是经转录作用把遗传信息传递到信使核糖核酸的结构中，然后再经翻译作用将遗传信息从信使核糖核酸传递到蛋白质结构中去。 蛋白质生物合成的实际过程：（1）合成的起始；（2）将氨基酸按一定的顺序联接；（3）肽链的终止；（4）完整的肽链从合成装置上的释放；（5）肽链的折叠以及新合成肽链的修饰等被称为翻译的问题。 现在知道蛋白质生物合成过程要比“复制”与“转录”复杂得多，需要大约200多种生物学大分子，其中包括有：核糖体，信使RNA，转移RNA，氨酰+RNA合成酶，以及一些辅助因子，即可能性蛋白质分子，延伸因子，释放因子（终止因子）等的协同作用。 蛋白质合成的场所在核糖体，蛋白质合成的原料是细胞中的20种氨基酸，反应所需有能量由ATP与GTP提供。 ? 一、遗传密码——三联子 贮存在DNA上的遗传信息通过mRNA传递给蛋白质，mRNA与蛋白质之间联系是通过遗传密码的破译来实现的，mRNA上每3个核苷酸翻译成蛋白质多肽链上的一个氨基酸，这3 个核苷酸就称为密码子，也称三联子密码。 翻译时从起始密码子AUG开始，沿着mRNA 5’→3’的方向连续阅读密码子，直至终止密码子为止，生成一条具有特定序列的多肽链——蛋白质，新生的多肽链中氨基酸组成和排列顺序决定于其DNA（基因）的碱基组成及其顺序，因此，作为基因产物的蛋白质最终是受基因控制的。 （一）三联子密码及其破译： 蛋白质中的氨基酸系列是由mRNA中的核苷酸系列决定的，所以要知道它们之间的关系，就要弄清核苷酸和氨基酸数目的对应比例，mRNA中只有4种核苷酸，而蛋白质中有20种，以一种核苷酸代表一种是不可能的，若以两种核苷酸作为一个的密码（二联子）它们能代表的只有42=16种，还是不足20种，而假定以3个核苷酸代表一个，则可以有43=64种，密码完全可以满足编码20种氨基酸的需要。 经过反复研究，Crick等人首先从遗传学的角度证实三联该码的构想是正确的。遗传密码的破译，即确定每种氨基酸的具体密码，在20世纪60年代初期是一项困难任务。 1、?以均聚物为模板指导多肽的合成 制备大肠杆菌的无细胞合成体系，在含DNA、mRNA、tRNA、核糖体、AA—tRNA合成酶及其他酶类的抽提物中加入Dnase，降解体系中的DNA，耗尽mRNA时，体系中的蛋白合成即停止，当补充外源mRNA或人工合成的各种均聚物或共聚物作为模板以及ATP、GTP、氨基酸等成分时又能合成新的肽链，新生肽链的氨基酸顺序由外加的模板来决定。因此分析比较加入的模板和合成的肽链即可推知编码某些氨基酸的密码。 2、?以随机共聚物指导多肽的合成 Nireberrg Ochoa等又用各种随机的共聚物作模板合成多肽，例如以只含A、C的共聚核苷酸作模板，任意排列时可出现8种三联子，即CCC、CCA、CAC、ACC、CAA、ACA、AAC、AAA，获得由Asn、His、Pro、Glu、Thr、Lys等6种氨基酸组成的多肽。 3、?以特定序列的共聚物为模板指导多肽的合成 （1）以多聚二核苷酸作模板可合成由2个氨基酸组成的多肽，如以多聚UG为模板合成的是多聚Cys和Val，因为多聚（UG）中含Cys和Val的密码： 5′------UGU GUG UGU GUG UGU GUG ------3′不管该码从U开始还是从G开始，都只能有UGU（Cys）及GUG（Val）两种密码。 （2）以多聚三核苷酸作模板可得到有3种氨基酸组成的多肽，如以多聚（UUC）为模板，可能有3种起读方式： 5′------UUC UUC UUC UUC UUC------3′ 或 5′------UCU UCU UCU UCU UCU------3′ 或 5′------CUU CUU CUU CUU CUU------3′ 根据读码起点不同，产生的密码子可能是UUC（Phe）UCU（Ser）或CUU（Len）所以得到的多肽可能是多聚苯丙氨酸，多聚丝氨酸或多聚亮氨酸，由此可知UUC、UCU、CUU分别是苯丙氨