分离技术简介-用10要点.pptVIP

现代实用生化分离技术 一、分离的意义 生物学研究中的氨基酸、多肽、蛋白质分析；核苷酸和核酸分析； 常用药物中有效体和无效体的分离分析； 多环芳烃等环境污染物的分离分析； 化工产品质量的分析；农药残留的分析；食品添加剂和饲料添加剂的分析等 样品 组成 含量 分离、分析鉴定、定量 各种分析工作，均离不开前期的分离工作。 基因的测序、功能 蛋白质的结构、功能，及其与其他物质的作用。 食品中的有效成分分析，如茶中的儿茶素、茶多酚等各种黄酮类物质的含量、功能及其影响因素 昆虫的粪便、挥发性物质、以及气味感受蛋白等。 常用的分析技术：x-射线晶体衍射、荧光光谱、紫外吸收光谱、生物质谱、核磁共振谱、红外光谱等 均需纯品才能得到有说服力的数据，因此测定前，必须分离纯化。 二、分离技术 其中，各种色谱分析法以其高超的分离能力，分离效率远高于蒸馏、萃取、离心等优点，目前已成为生物化学研究领域最常用、最实用的分离手段。 色谱和其它技术的联用，尤其是高效液相色谱－质谱（HPLC-MS），毛细管电泳－质谱(CE-MS)联用技术，对生物大分子的分离和鉴定也发挥了极大的作用。 常规分离技术 蒸馏 萃取 离心 薄层色谱和柱色谱 减压蒸馏、水蒸汽蒸馏、旋转蒸发、冷冻干燥 固相萃取、固相微萃取、索氏提取 超速离心、高速离心 毛细管气相色谱、高效液相色谱、毛细管电泳、逆流色谱、凝胶色谱、亲和色谱 先进的样品处理技术及现代仪器分离手段 实用分离技术课 介绍现代仪器分离技术：各种色谱技术及其应用，特点，方法优化的步骤、优缺点及其适用范围 常规的分离技术：主要介绍注意事项及适用范围。 第一章　　分离技术简介 第一节　　各种现代仪器分析分离技术介绍 气相色谱法：流动相为气体，固定相为固体或液体。 原理：样品加热气化后，在流动相的带动下通过装有固定相的色谱柱，利用样品各组分与固定相吸附或分配等作用强弱的差别，而将样品中各组分分开的技术。 填充柱气相色谱法 毛细管气相色谱 具有分离效率高、快速的优点，可以将差别较小的两组分分开　 毛细管气相色谱法应用 对各种酶的催化效率即酶的活性加以评价，研究酶的作用机理和功能。 化学反应和生化反应的监测 取样 处理 气谱分析：可知原料有多少发生了反应，生成了多少反应产物及副产物 优化反应条件的最佳温度、时间等条件 昆虫信息素研究 吸附收集 溶剂洗或加热脱附、浓缩 气谱分析 昆虫的触角电位分析 信息素 GC-MS *因为许多样品都具有分子量大、高温易分解的特点，不适合用气相色谱分析。有人估计，对于所得到的样品只有20%可以用气相色谱分析，80%可以用液相色谱分析。 气谱分析样品的要求 在一定温度下可以气化 高温下不分解 ＋ 分子量小于400 化学键稳定 气相色谱操作的程序 根据待分离样品的性质,选择一定固定相的色谱柱，安装 开机，设置气化室、检测器和色谱柱的温度 通载气 进样，检测 优化分离 改变分离温度 选择固定相 高效液相色谱：流动相为液体，固定相为固体或液体 原理：样品在流动相的带动下通过装有固定相的色谱柱，利用样品与固定相吸附或分配等作用强弱的差别，而将样品中各组分分开的技术。 正相： 流动相的极性固定相 固定相：硅胶 流动相：正己烷+异丙醇等 反相： 流动相的极性固定相 固定相：C8,C18等 流动相：水、乙腈、甲醇等 离子交换色谱 吸附色谱 分配色谱 高效液相色谱法应用 尤其是对于不能耐高温，不能气化的大分子量的生物物质如蛋白质、核酸等的分离具有一定的优点，目前在生物领域的研究中已广泛应用。 在生物化学中的应用 氨基酸、蛋白质、多肽分析 核碱、核苷、核苷酸、核酸分析 生物胺 在医药研究中的应用 常用药物分析 甾体药物研究 抗菌素药物 生物碱 在食品分析中的应用 糖类分析 有机酸及酸味剂分析 维生素分析 食品添加剂 在环境污染物分析中的应用 多环芳烃 多氯联苯 农药残留 酚类和胺类的检测 在精细化工中的应用 醇、醛、酮、醚 酸和酯 表面活性剂 聚合物 解热镇痛药物（APC）分离分析 阿斯匹林（A） 乙酰水杨酸 非那西丁（P）对乙酰氨基苯乙醚 咖啡因（C） 异丁基巴比妥 对氯乙酰苯胺 色谱柱：使用反相键和柱u-Bondapak C18（10um, 3.9mm*300mm） 流动相：38%乙腈的0.01%(NH4)2CO3溶液， 流 量：1mL/min, 紫外检测器：254nm 在9分钟内实现样品中相关组分分离。 色谱柱： 柱（1）Hy-Tach C18球形薄壳型固定相（2um, 4.6mm*30mm） 柱（2）Vydac C18全多孔型固定相(5um,孔径30nm, 4.6mm*250mm ) 流动相：(A)10%三氟乙酸水溶液； （B）含0.1%三氟乙酸的95%乙腈水溶液。 UVD： 210n