遗传实验6X小体要点.pptVIP

一、实验原理 1949年Barr等在雌猫的神经细胞中发现一种浓缩小体，而雄猫无。此小体处于凝集不活动状态，所有哺乳类雌体细胞中都有一个这种表现的小体，因此称Barr小体或X小体。 进而发现，当在雌或雄体中，有多于2条X染色体时，在间期细胞内除一条外，其余均形成X-小体。??? 异固缩的X染色体随机失活。 胚胎发育第16天，出现失活；卵子与精子受精后，其中失活的X染色质变为常染色质恢复活性。 二、实验目的 通过实验初步掌握观察与鉴别X-小体的简易方法，识别其形态特征及所在部位，为进一步研究人体染色体的畸变与疾病提供参考。 三、仪器、用品及试剂 光学显微镜，恒温水浴箱；牙签、载玻片、染色缸；Carnoy固定液（甲醇∶冰乙酸＝3∶l）95%、70%乙醇，硫堇染液；5N HCl。 四、试剂配置 1．硫堇染液配方： ①4%硫堇原液：4g硫堇粉末置研钵中以 50%乙醇100ml研磨溶解。过滤。 ②Michaelies缓冲液：醋酸钠9.714g，巴 比妥钠14.714g加双蒸水至500ml。 ③硫堇工作液（PH5.7）：0.1N HCl 32mlMichaelies缓冲液28 ml4%硫堇原 液400ml 五、操作步骤 l．取材、涂片：受检查者用水漱口数次，尽可能除去细菌和食物残渣；用洁净的牙签从口腔两侧颊部刮取粘膜，第一次刮取物弃去，将第二次、第三次刮取物涂在干净的载玻片上。 2．固定：涂片后干燥,待完全干燥后用95％乙醇中固定20-30分钟，再空气干燥。3．染色：玻片在蒸馏水中冲洗几次后5N HCl（40℃）水解10分钟，蒸馏水洗去多余HCl，在硫堇染液中染色20-30分钟。水洗。4．镜检、气干后即可镜检。若背景颜色过深可在75%乙醇、95%乙醇中分色后再镜检。 六、实验结果的观察 X染色质的识别方法：一般位于核膜内侧缘，形状多样，多为半圆形，三角形。 人体 口腔黏膜细胞X-小体 六、注意事项 l．涂片时应均匀涂成单层，取材细胞要 多些。取材前应漱口。2．镜检应选择完整、核质中颗粒均匀的 细胞观察，X-小体大小约为1μm，多 位于细胞核边缘。 作业： 认真填写实验报告 绘出人类间期X小体 讨论与分析实验结果 * * 人类正常的男女体细胞中，22对常染色体并无区别，但其性染色体分别为XY和XX。女性的两条X染色体中，有一条在间期呈现浓缩状态，可由适当的染料显示。正常女性间期细胞中X小体阳性率约为10—30%。 女性：XX 男性：XY 女性细胞内X染色体上基因翻译蛋白质的量是男性的两倍吗？ NO 人体X染色质的形成过程 不论细胞内有几条X染色体，只有一条是具有转录活性的，其余的形成异固缩的X染色质。 X染色质的本质 X染色质为兼性异染色质 核膜 X染色质 正常女性间期细胞核中X染色质阳性率为10％－30％，而男性则低于1％。 X染色质检查的临床应用 性别的快速鉴定 胎儿性别鉴定 可计数细胞的标准：a：核较大，轮廓清除完整，无缺损、皱褶，染色清晰。b：核质呈细网状或均匀的细颗粒状，无深染大颗粒及细菌污染 正常女性上皮细胞 直径约1μm, Feulgen染色阳性。 正常男性上皮细胞 具有两个X-小体的人体口腔黏膜细胞