8植物病毒课程.ppt

（a）PCR反应组份 * 一个目的DNA分子经20轮扩增后，可达106 * * * * * * * 2 RT-PCR 大多数植物病毒基因组为RNA，而Taq DNA聚合酶不能以RNA为模板合成DNA链，这就需要首先在逆转录酶的作用下，以RNA为模板合成互补的第一链DNA，之后才能进行常规PCR反应，这一技术称为反转录PCR （Reverse transcription PCR，简称RT-PCR）。 * 3 核酸杂交 原理：DNA—RNA碱基互补关系。 杂交：DNA—RNA形成异质双链的过程。 利用根据已知序列合成或制备的核苷酸片断——探针（probe）是否能与待测核酸杂交，判断与已知片断是否有同源性。 * * * * * 植物病毒病害的初步识别 与非侵染性病害的区别： 1. 发病中心有无 2. 在同一株植物上系统感染，不同部 位症状不均一 3. 有传染性，病害有扩散的过程 4.特定的症状，花叶、黄化、矮缩、丛 生、环斑、耳突、斑驳、蚀刻等 菜豆金花叶病毒属 Begmovirus Bean golden mosaic virus, BGMV Tobacco leaf curl virus, TLCV 联体球形， ssDNA 白粉虱传毒，机械、蚜虫种子均不传。 * BGMV * * 纤细病毒属（Tenuivirus) 水稻条纹病毒（Rice stripe virus, RSV) 粒体丝状， 4-6条 ssRNA, 灰飞虱传， 寄主范围广 * 类病毒viroid Potato spindle tuber viroid, PSTVd 种子种薯传播，也可经切刀和嫁接传染。 * Circular and linear forms of the Potato Spindle Tuber Viroid observed using a nucleic acid spreading technique followed by high angle shadowing with platinum metal.Magnified 350,000X * Yellowing and distortion of tomato, infected with spindle tuber viroid. Infected fruit will often fail to ripen. (Copyright D Elliott MAF NZ) * 菊花矮化类病毒Chrysanthemum stunt viroid Affected flowers in the foreground are also showing premature opening and colour break. * * Chrysanthemum stunt viroid Affected flower (right) The flower is reduced in size and showing marked colour bleaching.  * 植物病毒检测 与病毒病害的特征 * 植物病毒病的诊断 生物学检测 显微镜观测 血清学检测 分子生物学检测 鉴别寄主 传染试验 物理化学特性 核酸杂交 PCR 植物病毒检测 * 鉴别寄主 指用来鉴别某一病毒或其株系的具有特定反应的植物。 凡是病毒侵染后能产生快而稳定、并具有特征性症状的植物都可作为鉴别寄主。 鉴别寄主谱 系统侵染的寄主 局部侵染的寄主 不受侵染的寄主 组合使用几种或一套鉴别寄主 * 病毒生物学检测 * 鉴别寄主谱的方法简单易行，反应灵敏，只需要很少的毒源材料。 有时因气候或栽培等原因，症状反应不十分稳定。 鉴别寄主的优缺点 但工作量比较大，需要较大的温室种植寄主植物，且比较费时。 * 生物学检测 显微镜观测 血清学检测 分子生物学检测 鉴别寄主 传染试验 物理化学特性 核酸杂交 PCR 植物病毒检测 * 对汁液传播的病毒，可通过病株汁液的体外性状（钝化温度、稀释限点和体外存活期）来测定； 这些性状虽易受各种因素影响，但仍可作为区别不同病毒的依据之一，而且对混合侵染病毒的分离及制定病毒提纯方案具有参考价值。 植物病毒粒体的稳定性 * 病毒生物学检测 物理化学特性 TIP最低的病毒是番茄斑萎病毒，只有45℃； 最高的是烟草花叶病毒，为93℃； 大多数植物病毒为55～70℃。 病毒在病株粗汁液中，经恒温水浴处理10分钟即丧失侵染力的最低温度。