液相色谱-郭要点.ppt

组分保留时间太短： 此处解释电渗流 HPCE为管壁处的液体带动整体移动。 * 讨论： （1）流动相流速u对HPLC板高的影响（与GC对比） 1.2 提高柱效的途径 * 1）液体的黏度比气体大一百倍，密度为气体的一千倍，故降低传质阻力c 是提高柱效主要途径。 2）由速率方程知，降低固定相粒度(使A减小)可提高柱效。 3）液相色谱中，不可能通过增加柱温来改善传质，恒温。 4）改变淋洗液组成、极性是改善分离的最直接的因素。 （2）结论 * * 2、分离方法的选择 （choice of separation types） 了解 * * 三、 HPLC的特点和实际应用 1、利用其高柱效（n = 104片/米），有效分离极复杂体系中的痕量组分。 正相色谱分离有机溶剂中的物质 反相色谱分离水溶液中的物质----生化物质。 2、用离子型固定相建立的离子交换色谱分析离子型体的含量，如蛋白质、氨基酸、常见阴阳离子等。 3、利用多孔凝胶固定相建立空间排阻色谱法可分离高分子化合物。 4、利用手性固定相可以拆分分离具有手性的化合物。 * 1. 环境中有机氯农药残留量分析 固定相：薄壳型硅胶(37 ～50 ?m) 流动相：正己烷 流 速：1.5 mL/min 色谱柱：50 cm?2.5 mm (内径) 检测器：差示折光检测器 可对水果、蔬菜中的农药残留量 进行分析。 * * 2. 稠环芳烃的分析 稠环芳烃多为致癌物质。 固定相：十八烷基硅烷化键合相 流动相：20%甲醇-水 ～100%甲醇 线性梯度淋洗，2%/min 流 速：1mL/min 柱 温：50 oC 柱 压：70 ?104 Pa 检测器：紫外检测器 * * 高效毛细管电泳分析 分离新技术之 * * 1、概述 在电解质溶液中，位于电场中的带电离子在电场力的作用下，以不同的速度向其所带电荷相反的电极方向迁移的现象，称之为电泳。由于不同离子所带电荷及性质的不同，迁移速率不同，可实现分离。 * * 2、经典电泳分析 利用电泳现象对某些化学或生物物质进行分离分析的方法和技术叫电泳法或电泳技术。 * * 3、高效毛细管电泳分析 HPCE high performance capillary electrophoresis 高效毛细管电泳在技术上采取了两项重要改进： 一是采用了0.05mm 内径的毛细管； 二是采用了高达数千伏的电压。 毛细管的采用使产生的热量能够较快散发，大大减小了温度效应，使电场电压可以很高。 电压升高，电场推动力大，又可进一步使柱径变小，柱长增加。 高效毛细管电泳的柱效远高于高效液相色谱，理论塔板数高达几十万块/米，特殊柱子可以达到数百万。 * 4、仪器流程与主要部件 电压：0～30 kV； 分离柱不涂敷任何固定液； 紫外或激光诱导荧光检测器；(可检测到：10-19～10-21 mol/L) 缓冲液 缓冲液 正极 负极 进样机构 * * 5、电渗现象与电渗流 5.1 电渗流现象 当固体与液体接触时，固体表面由于某种原因带一种电荷，则因静电引力使其周围液体带有相反电荷，在液-固界面形成双电层，二者之间存在电位差。 当液体两端施加电压时，就会发生液体相对于固体表面的移动，这种液体相对于固体表面的移动的现象叫电渗现象。 电渗现象中整体移动着的液体叫电渗流（简称EOF）。 * 5.2 HPCE中的电渗现象与电渗流 石英毛细管柱，内充液pH 3时，内表面电离成-SiO-，管内壁带负电荷，形成双电层。 在高电场的作用下，带正电荷的溶液表面及扩散层向阴极移动，故将引起柱中的溶液整体向负极移动，速度 v电渗流。 * 5.3 HPCE中电渗流的方向 电渗流的方向取决于毛细管内表面电荷的性质： 内表面带负电荷，溶液带正电荷，电渗流流向阴极； 内表面带正电荷，溶液带负电荷，电渗流流向阳极； 石英毛细管电渗流的速度约等于一般离子电泳速度的5～7倍。 电泳 电渗流 * * 5.4 HPCE中电渗流的作用 各种电性离子在毛细管柱中的迁移速度为： 阳离子: v+ = v电渗流 + v+ef 运动方向与电渗流一致；最先流出 中性离子：v0 = v电渗流 运动方向与电渗流一致；中间留出 阴离子: v- = v电渗流 - v-ef 运动方向与电渗流相反；最后流出 带电情况不同的离子因差速迁移而分离。 电泳 电渗流 * * 5.5 HPCE中电渗流的流形 高效毛细管电泳：电荷均匀分布，整体