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菌种分离思路： @D!$Qj  ( 菌种筛选方案 ： ^Y$6$=$ [1] 初筛：目的是删去明确不符合要求的大部分菌株，把生产性状类似的菌株尽量保留下来，使优良菌种不致于漏网。初筛工作以量为主，测定的精确性还在其次。初筛的手段应尽可能快速、简单。 \ThZ3~u [2] 复筛的目的是确认符合生产要求的菌株，所以，复筛步骤以质为主，应精确测定每个菌株的生产指标。 .?l10!xy ( 菌种筛选的手段 Ccr_G- [1] 初筛 #,h4]P [2] 从菌体形态变异分析 *UaQIX [3] 平皿快速检测法： 具体的有纸片培养显色法、变色圈法、透明圈法、生长圈法和抑制圈法等 v+B3#lve*d [4] 摇瓶培养法： 初筛的摇瓶培养一般是一个菌株只做一次发酵测定，从大量菌株中选出10-20%较好的菌株，淘汰80-90%的菌株；而复筛中摇瓶培养一般是一个菌株培养3瓶，选出3-5个较好的菌株，再做进一步比较，选出最佳的菌株。 El

kG!@ 土中细菌的富集培养与分离 ?P I-$ 分离土样中的大部分细菌的分离程序中无需进行富集。但对某些少数细菌则要求特殊的富集或选择技术才能很好地被分离培养。 rIE 9kas+ 富集方法： 7+=-z[/ 运用细菌的酶诱导性，在分离培养基中添加若干抗生素、复杂底物及生长因子的前体物质来激活细菌某一特殊基因组，可以建立起若干富集技术。富集可以促进抗性的产生并维持下来。 9_zTYdf 6 )2DU p+} 土样中细菌的富集：适度稀释后，取0.1m1涂布已添加及未添加富集底物(如几丁质、纤维素等)的土浸出汁平板。 bW UA%S#` 植物体上细菌的分离：无菌富集，加植物浸出液适度培养取样，洗涤，取1ml经适度稀释后涂布平板。 BapROn@
水中细菌的分离：水样通过0.22μm无菌滤膜，取出滤膜用1ml无菌稀释液将滤膜上的沉积洗下。用样本稀释液适度稀释,涂布平板倒置培养或滤纸压印分离法。 @1P5Qb,2La HZP,; T`PD 水中细菌分离的简易富集技术： (,y5ywYTS (1) 在无菌的、用棉团塞好的广口三角烧瓶中连续培养，定期取样涂布适宜分离琼脂平板上；
L;cc^ (2) 在不同水体的水样中加入一定的底物如蔗糖、多糖及蛋白质等，同样可以促进水中微生物的增殖。 0XF39d# (3) 培养过程中可加入低浓度的抗真菌剂以抑制真菌的生长。 W:TEgS+ (4) 另一富集方法是在培养烧瓶中添加细菌“附着材料”，如无菌的植物组织或土壤浸出液。 8!qqyN (5) 通过改变培养温度和培养周期可选择性富集嗜冷性细菌、中温菌和嗜高温菌。 YEy[VQd 次代培养及纯化步骤： /m}e6-\ 1、涂布的平板经培养后，如生长出菌落，则按涂布不同稀释度的稀释液所得的单菌菌落和多菌菌落对琼脂平板进行分类。 Wp ua:q 2、用无菌牙签将菌落转接到筛选平板上及转接至添加有少量天然浸出液的适宜保藏琼脂斜面上。 Hh:a3tV 3、筛选平板经培养后，按生长出菌落的形态学特征如色素、菌落形态等进行最初分组。 f1L-K]0  4、将认为有希望的菌落用牙签转接到另一模拟分离琼脂平板上进行筛选。 Q9($Xzw 6 ut}x#qcR 放线菌的分离 U c
o8Ui 土样中放线菌的非选择性分离：土样风干，磨碎，无菌海绵压印土样后压印平板后培养。 8|Py6w 植物体上放线菌的分离：无菌取植物组织，干燥以减少细菌数量，剪碎植物材料后植入平板表层后培养。也可洗下微生物后振荡培养。 X 
QDH* 水中放线菌的分离： 为使所要分离的放线菌的数量种类增多，一般将水样离心或滤纸过滤，取离心沉积或滤纸表面沉积进行系列稀释和涂布。 5/p))(zt 次代培养及纯化 b+5mHyyd 菌落形成后可根据肉眼可见的菌落形态上的差异，作初步的鉴定和区分。 FE5T@-4L 通过高倍放大进行镜检，可了解气生和营养孢子形成情况。 %[rH]bqk 成功地分离出各种不同的放线菌属及种的关键是所采集样本的本身及其分离用的琼脂培养基；而肉眼识别不同的生长形态、从而初步地加以鉴定，在分离放线菌时显得尤为重要。 Yko6%Wcm 将分离平板上所形成的菌落用经火焰灼烧灭菌的钩形针或无菌牙签挑取，点接到琼脂平板上进行影印培养，以进一步筛选和分离。 $k~rVh1 真菌分离 #}%6MN^ 1、利用低碳／氮比的培养基可使真菌生长菌落分散，利于计数，分离和鉴定。这里主要是利用营养成分的减少而使生长减慢，并由此限制真菌的迁涉生长。 0a