细胞工程复习重点要点.docx

第一章 细胞培养 1、细胞系：原代培养经首次传代成功后即成细胞系，由原先存在于原代培养物中的细胞世系所组成。 2、细胞株：通过选择法或克隆形成法，从原代培养物或细胞系中获得的具有特定性质或标志的细胞群。细胞株的这种特定性或标志必须在整个培养期间始终存在。 3、传代：体外培养细胞生长增殖达到一定密度后，需要分离出一部分细胞和更新营养液（培养基），这一过程叫传代。 4、基本条件：无菌无毒、营养需要、生长环境（pH值、温度、渗透压） 5、设备：环境（无菌实验室、净化工作台、恒温培养箱、CO2罐） 储存（液氮储存罐、液氮运输罐、超低温冰箱） 处理（倒置显微镜、离心机、高压蒸汽消毒器、干燥箱、高温烤箱） 6、培养基必须具备的基本条件： 营养物质、缓冲能力、等渗性、无菌 7、生长状态指标： 细胞生长曲线生长倍数、细胞分裂指数、细胞接种存活率、克隆形成率 8、细胞生长曲线：接种培养—计数—制图； 曲线近似“S”形，潜伏期—对数生长期—平台期； 生长曲线反映的是某一特定培养条件下的细胞增殖规律。 第二章 肿瘤细胞 1、癌基因的产物：原癌基因的产物主要包括：①生长因子，如sis，②生长因子受体，如fms、erbB，③蛋白激酶及其它信号转导组分，如src、ras、raf，④细胞周期蛋白，如bcl-1，⑤细胞凋亡调控因子，如bcl-2，⑥转录因子，如myc、fos、jun。 2、原癌基因的描述判断：原癌基因是细胞内与细胞增殖相关的基因，是维持机体正常生命活动所必须的，在进化上高等保守。当原癌基因的结构或调控区发生变异，基因产物增多或活性增强时，使细胞过度增殖，从而形成肿瘤。 3、P53基因描述：转录调节因子；使癌细胞凋亡，防止癌变；还具有帮助细胞基因修复缺陷的功能。 4、肿瘤细胞体外培养的生物学特性： 形态和性状（形态不规则，界限清晰，伸展较差，核膜、核仁轮廓明显，核仁多、核浆丰富|折光性强，表面微绒毛多） 生物特性（营养要求不高，自分泌促增长因子，生长方向性消失、失去接触抑制，细胞倍增周期短） 永生性、侵润性、异质性、细胞遗传性。 第三章 污染控制、冷冻保存 1、细菌、真菌污染的控制：过滤除菌（0.22 μm）、抗生素（预防用药：①双抗生素---青霉素，链霉素，②真菌：两性霉素B；污染后清除用药（在污染早期可能有效）：需采用大于常用量5-10倍的冲洗法，于加药后作用24-48小时，再换常规培养液。） 2、支原体污染的用药控制：抗生素（Cip，BM-1+BM-2，M-plasmocin）方便经济有效、加温处理、支原体特异的抗血清 3、细胞冻存和复苏的方法步骤： 冻存：①常规技术消化并收集细胞于离心管中离心；②去上清，逐滴加入4℃预冷的冻存液，轻轻重悬细胞后，均匀分装于冻存管中，做好标记；③尽快将冻存管装于纱布袋中，悬于液氮液面上方或低温冰箱（-70℃）过夜；④次日转入液氮中。 复苏：从液氮罐中取出冻存管——迅速放入38 ℃水浴中，并不时摇动，在1分钟内使细胞完全融化——无菌条件下逐滴转移至加有适量培养液的离心管中——根据细胞的要求离心，弃上清——加入适量培养液，轻轻重悬细胞，接种培养过夜（接种浓度一般106/ml）——次日更换培养液，继续培养，并观察生长情况。 第四、五章 一、病毒感染细胞测定方法：检验标本→杀灭杂菌（青、链霉素）→检测病毒的存在：接种易感的动物→出现病状； 鸡胚→病变或死亡； 细胞培养→细胞病变→鉴定病毒种型（血清学方法）。 繁殖指征—— （1）细胞致病作用（Cytopathic effect, CPE） （2）红细胞吸附现象（Hemadsorption phenomenon） （3）干扰现象（Interference phenomenon） （4）包涵体（Inclusion body）形成 （5）代谢生长抑制（Growth inhibition） （6）细胞转化、出现“转化灶”（Transformation） 二、免疫酶染色法 1、病毒感染细胞的检测方法：免疫酶染色法：链霉亲和素-生物素-过氧化物酶复合物技术（SABC法）；灵敏性高，对比度佳。 2、免疫酶染色法原理 Step 1：特异性第一抗体+组织细胞标本共孵育； Step 2：通过生物素化第二抗体与第一抗体结合； Step 3：借助亲和素与生物素的天然亲和性，将多个生物素化辣根过氧化酶连接为一个ABC复合物； Step 4：复合物中亲和素结合二抗上的生物素，介导ABC复合物结合到抗原抗体复合物上。加入显色底物后，通过酶促反应，显示组织细胞相应的抗原。 3、免疫酶染色法主要材料： （1）磷酸盐缓冲液——洗涤 （2）Tr