细胞培养基的质量控制(定稿)要点.pptx

细胞培养基的质量控制 陈小云 中国兽医药品监察所菌种室细胞组 2010年6月 前言 细胞培养基在生物制药领域的应用 国内外对细胞培养基的管理 细胞培养基的质量控制 报告内容 前言 ? 细胞培养基从1903年开始发展 ? 最初：天然组织液 血液 血清 组织提取物 体液的化学分析 ? 1950年，199培养基 ? 上世纪60年代，设计出无血清培养基 简单基础培养基 – BME (Eagle’s 基础培养基) – EMEM (Eagle’s 最低必需培养基) – GMEM (Glasgow’s 改良Eagle’s培养基) – DMEM (Dulbecco’s改良Eagle’s培养基) – RPMI (Roswell Park Memorial Institute洛斯维公园纪念研究所培养基) BME (Eagle’s 基础培养基) ? 最初为培养 mouse‐L 和 HeLa细胞而设计 ? 在所有合成细胞培养基中使用最广泛的一种 ? 可用于测定正常(WI‐38)和转化(鼠‐L和HeLa) 细胞单层的生长反应 ? BME 是Eagle’s 最低必需培养基(EMEM or MEM) 和Dulbecco’s改良Eagle’s培养基(DMEM)的前身 EMEM (Eagle’s 最低必需培养基) ? 13种氨基酸 ? 8种维生素 ? 6种离子 ? 可补充血清（提供必要的不明成分） 必需氨基酸 组氨酸 异亮氨酸 亮氨酸 赖氨酸 甲硫氨酸 (和/或 半胱氨酸) 苯丙氨酸 (和/或 酪氨酸) 苏氨酸 色氨酸 缬氨酸 GMEM (Glasgow’s 改良Eagle’s培养基) ? 由lan MacPherson和Michael Stoker发明，以改良EAGLE‘S培养基 ? 该培养基用于研究遗传因子对细胞特性的影响。 ? 该培养基是中BME的基础上，添加10%胰蛋白示磷酸盐和两倍常规浓度的氨基酸和维生素。 DMEM (Dulbecco’s改良Eagle’s培养基) ? DMEM 最应用最广泛的改良Eagle‘s培养基。 ? DMEM 是由基础Eagle培养基(BME) 改良而来，含有4倍浓度的氨酸酸和维生素，以及其它补充成分 ? 最初的DMEM 含有1000 mg/L的葡萄糖，最初用于培养鼠胚胎细胞 ? 为培养特定细胞，可将葡萄糖浓度优化为4500。 Renato Dulbecco, 因1955年发明DMEM，于1975年获诺贝尔医学奖 RPMI (Roswell Park Memorial Institute) ? 由lan MacPherson和Michael Stoker发明，以改良EAGLE‘S培养基 ? 该培养基用于研究遗传因子对细胞特性的影响。 ? 该培养基是中BME的基础上，添加10%胰蛋白示磷酸盐和两倍常规浓度的氨基酸和维生素。 细胞培养基在生物制药领域的应用 细胞培养基是以动物细胞大规模培养为技术平台，研发及生产生物药品的关键原材料之一 蛋白药物 抗体药物 人用疫苗 兽用疫苗 其它新药研发和科学实验等 “ 培养基虽不是细胞培养中唯一重要因素，但确实是最重要的一种” ——Wurm博士，瑞士联邦科技学会生物工艺学教授 ——2005，《 Genetic Engineering News》 细胞培养基在生物制药领域的应用 2011年全球生物制药市场销售额为1600亿，占据全球制药份额的19% 预计2015年生物制药产品的销售额将超过2400亿 生物制药在制药行业比重的增加决定着细胞培养基市场的不断扩大与发展，而生物制药行业的发展趋势也决定着细胞培养基市场的发展趋势。 全球利用生物反应器大规模培养动物细胞生产生物制品的普及率到达80%，均使用个性化（或定制）的细胞培养基。 个性化配方（属于非公开、商业秘密）的细胞培养基占世界主要细胞培养基制造商销售额的70-90%； 无血清无动物来源成分细胞培养有逐渐取代传统的加血清培养方式的趋势 细胞培养基在生物制药中的重要性 细胞培养基实际上就是生物技术产业的一个“菜篮子”工程，只要用到细胞来做生物技术产品就必须要用到细胞培养基。 营养丰富的细胞培养基可以缩短细胞生长周期从而缩短生产周期，可以增加细胞密度、增加收获次数、提高表达量，提高生物制品的产量 培养基可能给生物制品带来潜在污染，影响产品的分离纯化，关系到生物制品的质量安全 细胞培养动物疫苗 疫苗 细胞系 疫苗 细胞系 口蹄疫病毒 BHK-21 牛副流感病毒3型 MDBK 猪繁殖与呼吸综合征病毒(中国) Marc-145 牛腹泻病毒 MDBK 猪繁殖与呼吸综合征病毒(美国) MA-104 牛呼吸道合胞病毒 MDBK 狂犬病毒 BHK-21 牛鼻气管炎病毒