向文胜毛细管电泳要点.pptVIP

§11~1 概述 2．毛细管电泳与传统电泳的区别： 由于传统电泳的局限性:在两端电压达到一定值时，会在电解质离子流中产生自热（又称之为：焦耳热）。这种热引起径向粘度和速度的梯度变化。从而导致区带展宽、降低效率。而毛细管电泳与传统电泳的根本区别是：毛细管电泳是在散热效率极高的毛细管内（10-200μm）进行。 毛细管电泳的主要优点 ?高灵敏。一般紫外检测器的检测极限在10-13-10-15mol之间，荧光检测可达10-19-10-21mol. ?高分辨。峰分离效率超过一百万理论塔板数，一般可达几十万。 ?速度快。许多分析在10分钟内完成，有的可在60秒内完成。 ?进样少。比较其它分离方法需要更少的样品制备量，一般只需毫微升的进样量。 ?成本低。毛细管可长期使用和极数量的可自己配制的缓冲液 毛细管电泳法将传统的电泳分离技术和现代的分离技术（如HPLC、GC等）中的检测器、数据处理技术有机地结合起来。形成了一种新的高效分离技术。就其灵敏度、分离效果和速度，以及成本消耗等方面较液相色谱法具有更多的优势和长处，同时，它与液相色谱法具有很好的互补性。 §11~2 毛细管电泳基本原理 §11~3 毛细管电泳的检测器 §11~4 毛细管电泳有关术语 §11~5 毛细管电泳技术的分类 毛细管区带电泳的相关因素 毛细管电泳中常用的缓冲液 不同的缓冲液添加剂 二、毛细管凝胶电泳CGE b.无胶筛分 使用粘度低的线性聚合物，如甲基纤维素、羟基丙基甲基纤维素，取代聚丙酰胺。这种聚合物的溶液仍有分子筛的作用，只是不作聚合。因此避免了空泡的形成。它与凝胶相比具有方便、简单、柱子寿命长等优点，其功能可通过调节不同的线性聚合物加以变化和扩充，只需要一根简单的毛细管就可进行不同分子的分离。缺点是分离能力略差于凝胶柱。 在毛细管凝胶电泳中常用的材料是十二烷基磺酸钠－聚丙酰胺（SDS-PAGS）、甲基纤维素、羟基丙基甲基纤维素等 三、胶束电动力学毛细管电泳MECC 在MECC 中选择的表面活性剂须符合几个要求： ①．单一粒度非常的小。 ?．在溶液中是稳定的。 ③．粒子表面带负电荷。 ④．溶质（被分离组分）进出非常的快。 流动相缓冲液： 在MECC中可通过改变流动相进行选择性的调节。主要是改变缓冲液的种类、成分、pH和离子强度，同时也可以添加有机改良剂，如：丙醇、甲醇和乙腈等。 四、毛细管等电聚焦电泳CIEF 五、毛细管等速聚焦电泳CITP 毛细管凝胶的材料: a.凝胶可分为无机凝胶和有机凝胶或分为物理和化学凝胶。 无机凝胶有多孔硅胶、多孔玻璃； 有机凝胶有葡聚糖、交联聚丙酰胺和琼脂糖等。 毛细管凝胶电泳的应用 ? DNA的测定： 毛细管凝胶电泳和无胶筛分技术已广泛地用于低聚核酸段、引物、探针和不敏感的低聚 DNA的高灵敏分析，以及双链DNA片段大小的测定，对未经制备的PCR产物可进行高灵敏度的检测。由于毛细管凝胶电泳具有低消耗、快速、高效等优点，因此，它发展成为第二代DNA序列测定仪。 图 ΦX174DNA的HaeⅢ限制酶切产物的分离图谱 ? SDS毛细管凝胶电泳在蛋白质分离中的应用： SDS（十二烷基磺酸钠）是一种阴离子表面活性剂，被分离的蛋白质与SDS键合、改性，使蛋白质由球状转变为棒状，而SDS分子的负电荷掩盖了蛋白质分子原有的电荷，每克蛋白质可吸附约1.4克SDS，从而形成有确定的电荷/体积比的蛋白质－SDS络合物，在聚丙烯酰胺凝胶中进行电泳时，各蛋白质棒状分子具有相等的电荷密度，因此，这种电泳分离是纯粹地按分子体积大小进行的。在蛋白质的测定中，SDS毛细管凝胶电泳可用于分子量大小的测定。贝克曼公司生产了专门测定蛋白质分子量的SDS200分析盒 图 凝胶电泳测定蛋白质的分子量分离图谱 MECC是Terabe在1984年首先提出的。这一技术的最大特点是使毛细管电泳有可能在用于分离离子化合物的同时进行中性物质的分离，因此在各个领域特别是生物制品和药物制品领域显示了广泛的应用前景。 在MECC中，当把离子型表面活性剂加入缓冲液中，并且其浓度足够大时这种表面活性剂的单体就结合在一起，形成一个球体我们称其为胶束。目前，以十二烷基磺酸钠（SDS）使用最为普遍。图是SDS的结构。 原理： 在MECC的系统中存在两个相：流动的水相和起到固定相作用的胶束相，被分离物在这两个相之间分配，由于它们在胶束中具有保留能力而产生不同的保留时间。和区带电泳一样，缓冲液在管别壁处形成正电，使其显示强烈的向负极移动的电渗流，而SDS胶束由于其外壳带负电性具有向正极迁移的倾向。在一般情况下，电