微生物遗传育种和菌种保藏要点.pptVIP

第七章 微生物的遗传育种和菌种保藏 第一节 微生物的遗传育种 二 微生物的基因组结构 基因是一段DNA DNA就是脱氧核糖核酸（长链） 三 基因突变和诱变育种 四 细菌的基因重组 （一） 转化 （二）转导 （三）接合 第二节 菌种的退化、复壮和保藏 （二）菌种退化的防止 （三）菌种的复壮 二 菌种保藏 干燥保藏法 隔绝空气保藏法 真空冷冻干燥保藏法 转导的特点 需要噬菌体做媒介，不需要细胞间直接接触 噬菌体蛋白质包裹寄主任何一部分DNA片段 普遍性转导 局限性转导 颗粒携带特定的染色体片段并将固定的个别基因导入受体，故称为局限性转导 供体菌和受体菌的完整细胞经直接对接而传递大段 DNA的过程。 + A+B+C-D- A-B-C+D+ 接 合 及 其 发 现 A+B+C+D+ A:生物素 B:甲硫氨酸 C:苏氨酸 D:赖氨酸 三者根本区别在于DNA转移的方式不同 转化： 供体DNA片断→注入受体细胞，通过细胞膜 接合： 供体进入受体通过性纤毛 转导： 供体DNA片断通过媒介－噬菌体携带进入受体 一 菌种的退化、防止及复壮 （一）退化 概念：变异导致某一或某些遗传性状的减退消失，或杂菌污染造成菌落的细胞形态不纯。 原因： 基因突变 质粒消失 变异菌株性状分离 环境条件变化（恢复正常条件，变异现象消失） 1 少传代 2 创造良好的环境条件 3 利用不同类型的细胞进行接种传代 放线菌、霉菌用孢子、不用菌丝。 4 采用良好的保藏方法 1 纯种的分离 稀释平板法、单孢子或单细胞分离。 2 改变营养条件 不良环境条件常能引起菌种退化。 3 通过感染寄主复壮 4 淘汰已退化个体 如淘汰“5406”放线菌可用－10 ℃ ～－30℃低温处理5～7天，死亡率达80％，有健壮个体存在。 ◆ 菌种或培养物保藏是一项最重要的微生物学基础工作，微生物菌种是珍贵的自然资源，具有重要意义。◆ 中国微生物菌种保藏委员会(CCCCM) ◆ 中国典型培养物保藏中心(CCTCC) ◆ 美国典型菌种保藏中心(ATCC) ◆ 美国的北部地区研究实验室(NRRL) ◆ 荷兰的霉菌中心保藏所(CBS) ◆ 英国的国家典型菌种保藏中心(NCTC) ◆ 日本的大阪发酵研究所(IFO) ◆ 国际微生物学联合会(IAMS)还专门设立了世界菌种保藏联合会(WFGC)，用计算机储存世界上各保藏机构提供的菌种数据资料，可以通过国际互联网查询和索取，进行微生物菌种的交流、研究和使用。 原则：创造条件使其代谢活力减弱，生长繁殖受抑制。 目的：菌种不死、不退、不杂。 利用低温可抑菌。 常用4 ℃ ～5 ℃冰箱。 时间不超过3个月。 需传代培养，是进行微生物保藏的基本方法。常用的有琼脂斜面、半固体琼脂柱及液体培养等。在规定的时间内进行移种 。 传代十分繁琐，容易污染，特别是会由于菌株的自发突变而导致菌种衰退，使菌株的形态、生理特性、代谢物的产量等发生变化 菌种低温保藏法 * * 本章主要内容： 微生物的遗传育种 菌种的退化、复壮和保藏 内容提要： 遗传的物质基础 微生物的基因组结构 基因突变和诱变育种 细菌的基因重组 一 遗传变异的物质基础 三个经典实验： 转化实验 噬菌体的感染实验 植物病毒的重建实验 （一）转化实验 1944年 实验材料： 肺炎双球菌 实验方法： 动物实验 细菌培养实验 S型菌无细胞抽提液试验 实验材料： 肺炎双球菌 光滑型（S） 粗糙型（R） 有 荚 膜 菌落光滑 分泌毒素 致 病 无 荚 膜 菌落粗糙 无 毒 不 致 病 SⅠSⅡSⅢ三个血清型 RⅠRⅡRⅢ三个血清型 实验材料 转化实验（1）动物实验 活 死 死 加活R菌或死S菌 加活S菌 加活R菌和热死S菌 抽血分离 活的S菌 转化实验（2）细菌培养实验 ＳⅢ〖热死〗 无菌落生长 体外培养 ＲⅡ〖活菌〗 体外培养 ＲⅡ菌落 ＲⅡ菌落多 ＳⅢ菌落少 体外混合培养 ＳⅢ〖热死〗 ＲⅡ〖活菌〗 说明：加热杀死的S型细菌中可能存在某种物质， 能通过某种方式进入R型细菌。 转化实验（3）S型菌无细胞抽提液试验 大量R菌落 活R菌 S菌无细胞抽提液 + 活R菌 + S菌DNA S菌落 S菌Pr S菌多糖 R菌落 活R菌 + 说明：遗传因子是以DNA为物质基础。 （二） 噬菌体的感染实验 1952年 Pr 只含S不含P DNA只含P不含S 原理 步骤 1：用含同位素Ｓ35, P32的放射性物质标记噬菌体