2.2.1动物细胞工程程序.ppt

细胞贴壁:培养贴附性细胞时,细胞要能贴附于底物上才能生长繁殖. 动物核移植是将动物的一个细胞的细胞核,移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中.使其重组并发育成一个新的胚胎,这个新的胚胎最终发育为动物个体 专题2.2动物细胞工程 动物细胞培养 动物细胞融合 单克隆抗体制备 细胞核移植 动物细胞工程技术 动物细胞工程的基础 2.2.1动物细胞培养和核移植技术 （一）、概念 是指从动物机体内取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。 （二）、原理 细胞分裂增殖 （三）、过程 幼龄动物 剪碎组织 原代细胞培养 取动物器官 和组织 细胞悬浮液 传代细胞培养 胰蛋白酶处理 单个细胞 胰蛋白酶处理 单个细胞 细胞接触抑制 细胞在贴壁生长过程中，随着细胞分裂，数量不断增加，最后形成一个单层，此时细胞间相互接触，细胞分裂和生长停止，数量不再增加。 有关概念 原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。一般培养的第1代细胞与传10代以内的细胞称为原代细胞培养。 传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。 归纳 过程 取 的组织、器官 细胞悬浮液 酶 贴满瓶壁的细胞 单个细胞 加入 液 动物胚胎或幼龄动物 胰蛋白 培养 接触抑制 原代 培养(分装前) 1-10代细胞 遗传物质 改变 原代细胞 培养 加 液 40—50代细胞(细胞株) 未 遗传物质 改变 无限传代（细胞系） 已 传代培养 胰蛋白 酶 有关概念 　　细胞株：原代细胞一般传至10代左右细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到40~50代，这种传代细胞为细胞株。 细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。 细胞株和细胞系的区别： 细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。 思考题： 1、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？ 2、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？ 因为这些组织或器官，分裂能力旺盛，易于培养。 成块组织使细胞靠在一起限制了细胞的生长和增殖，且细胞不能与培养液充分接触，不利于培养。 3、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可说明细胞间的物质是什么成份？ 催化蛋白质水解。细胞间的物质主要是蛋白质(胶原蛋白等)。 4、细胞膜的主要成份是什么？ 蛋白质和磷脂 5、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？ 能 6、既然胰蛋白酶能将细胞消化掉，那将动物组织分散成单个细胞要注意什么问题呢？ 7、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？ 注意时间的控制 不能，因为两者的最适PH不同，而正常组织细胞的生存环境与胰蛋白酶的最适PH较接近 1、无菌、无毒的环境 保证细胞顺利的生长增殖 添加一定量的抗生素，定期更换培养液 添加：糖（葡萄糖）、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素、动物血清等。 （四）、动物细胞培养的条件 2、营养 3、温度和PH 培养室中控制,使之达到 36.5 ± 0.5℃, 7.2~7.4 培养箱中提供O2和CO2（95%空气和5% CO2 ） 4、气体环境： （五）、动物细胞培养技术的应用 （3）细胞的生理、药理、病理研究 （1） 培养健康细胞用于烧伤病人皮肤移植 （2） 基因工程的受体细胞 植物组织培养和动物细胞培养的比较 比较项目 植物组织培养 动物细胞培养 原理 细胞的 细胞 培养基特有成分 、植物激素 葡萄糖、 培养结果 植物体 培养目的 快速繁殖、培育无病毒植株 获得 全能性 增殖 蔗糖 动物血清 细胞株、细胞系 细胞,某些蛋白质 资料一： 培养的动物细胞可以用于检测有毒物质。许多致畸、致癌物质加入培养液后，培养细胞会发生染色体结构和数目的变异。根据变异细胞占全部培养细胞的百分数，可以判断某种物质的毒性。现在动物细胞培养已经成为检测有毒物质的快速而灵敏的有效手段。 资料二： 人工关节——软骨再生 1.第一次手术: 从病人关节软骨中未 受力的部分，取出一片约为葡萄干大小的健康软骨组织。 2.分离软骨细胞并经三星期的体外 培养，使细胞数增加约10～20倍。 3.第二次手术: 清理软骨受损的部分，从下方骨头部位取出一片约与伤口大小相同的骨膜，缝在伤口上方，再将软骨细胞注射到骨膜下方。 资料三： 结果: 经过复健一年后即可