4-2免疫血清制备及效价测定-4程序.pptVIP

下载本文档

39
0
约1.32千字
约 13页
2016-08-06 发布于湖北
举报
版权申诉

4-2免疫血清制备及效价测定-4程序.ppt

1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击这里二次下载。
3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次，网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档

免疫血清制备及效价测定（2）补体溶血反应法实验目的：了解补体在溶血反应中的作用熟悉抗血清效价测定方法掌握补体介导的细胞溶解机理实验原理：作为抗原的绵羊红细胞（sheep red blood cell，SRBC）与其对应抗体（溶血素）结合后，通过补体活化的经典途径激活补体，经过一系列放大的级联反应，最后形成膜攻击复合体（MAC），产生膜攻击作用，导致SRBC溶解，发生溶血反应。补体激活途径经典补体激活途径经典补体激活途径实验材料： 1. 1％ SRBC悬液 2. 阳性对照溶血素（抗绵羊红细胞抗体，适当稀释） 3. 豚鼠新鲜血清（当做补体用，临用前稀释成适当浓度） 4. 生理盐水 5. 试管架、试管、吸管、37℃水浴箱 6. 自制的小鼠抗SRBC抗血清摘取小鼠眼球放血：将小鼠抓出来，放在鼠笼盖上，用右手抓住尾巴，让它向前爬，用左手抓住耳朵及脑后毛皮，捏紧，使眼珠鼓出来，用小指和无名指压住鼠尾巴，小镊子夹住并迅速摘出眼球，将小鼠血收集入一洁净的平皿中。尔后，通过拉脱颈椎的方法将小鼠处死。操作步骤： 1）取洁净小试管12支，排列和做标记如下图所示； 2）分别在1、2、3号试管中加入生理盐水0.5、0.75、1.0ml； 3）将制备好的免疫血清进行1：20稀释，然后分别在1、2、3号试管中加入稀释好的免疫血清0.25ml； 4）依下图稀释血清； 1 3 2 4 5 6 7 8 9 10 11 12 加入生理盐水 0.5 ml 0.75 ml 1.0 ml 1:60 1:120 1:240 1:480 1:80 1:160 1:320 1:640 1:100 1:200 1:400 1:800 弃去 0.5 ml 弃去 0.25 ml 弃去 0.75 ml 0.25ml 0.25ml 0.25ml 0.25ml 0.25ml 0.25ml 0.25ml 0.25ml 0.25ml 弃去 0.25 ml 弃去 0.25 ml 弃去 0.25 ml 弃去 0.25 ml 弃去 0.25 ml 弃去 0.25 ml 4-12号管，每管加入生理盐水0.25ml 5）每管中：免疫血清0.25ml、1：30稀释的补体0.5ml、生理盐水0.5ml、1%SRBC 0.25ml； 6）另作一管，记为13号试管，加入1.25ml生理盐水和0.25ml的1%SRBC，作为阴性对照； 7）另作一管，记为14号试管，加入阳性对照溶血素0.25ml、 1：30稀释的补体0.5ml、生理盐水0.5ml、1%SRBC 0.25ml，作为阳性对照； 8）37oC水浴15-30min，观察结果。完全溶血不完全溶血无溶血(对照) 37oC水浴15-30min，观察结果。结果判定：观察溶血现象，以呈现完全溶血的血清最高稀释度为溶血素效价（ X 6 ）。 * * * *