第1部分专题52多聚酶链式反应扩增DNA片段概念.ppt

(2)经过一次循环后，产生的两个DNA分子分别含有引物Ⅰ和引物Ⅱ。 (3)由于作为原料的四种脱氧核苷酸被32P标记，所以新合成的子链均含有放射性，一次循环后的两个DNA各有一条链含32P，若复制n次，产生子链共2n×2，其中只有亲本的两条母链不含32P，则其所占比例为2/(2n·2)＝1/2n。 [答案]　(1)5′－G－A－OH 　　　　a链5′－G－G……T－C－3′ 　　　　　　 HO－A－G－5′ (2)5′－G－G……T－C－3′　3′－C－C……A－G－5′ 　 3′－C－C……A－G－5′　5′－G－G……T－C－3′ (3)每个DNA分子各有一条链含32P标记　1/2n 理论上DNA扩增呈指数增长。若只有一个DNA分子作模板，则复制n次后有2n个DNA分子；若一开始有m个DNA分子作模板，则复制n次后有m×2n个DNA分子；实际操作过程中由于无关变量的影响，一般来说实际值要略小于理论值。 点击进入 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 返回 第 1 部分 专 题 5 课题 2 理解教材新知 把握热点考向 应用创新演练 知识点一 知识点二 考向一 考向二 1.DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，只 能从3′端延伸DNA链。 2．DNA的合成方向总是从子链的5′端向3′ 端延伸。 3．PCR反应需要DNA模板、引物、四种脱氧核苷酸、耐热 的DNA聚合酶等条件。 4．PCR原理：DNA热变性的原理。 5．PCR每次循环都包括变性、复性和延伸三步。 6．PCR扩增DNA片段可以使目的片段呈指数增长。 [自读教材·夯基础] 1．细胞内DNA复制的条件 原料 4种 模板 2条DNA母链 酶 和 引物 使DNA聚合酶能够从引物的 开始连接脱氧核苷酸 脱氧核苷酸 解旋酶 DNA聚合酶 3′端 2．PCR扩增的原理及条件 (1)PCR技术：即 ，是一种 迅速扩增 的技术。它能以极少量的 为模板，在短时间内复制出上百万份的DNA拷贝。 (2)扩增方向：总是从子链的 端向 端延伸。 多聚酶链式反应 体外 DNA片段 DNA 5′ 3′ (3)引物： ①特点：是一小段 或 ，能与 的一段碱基序列互补配对，用于PCR的引物长度通常为 个核苷酸。 ②需要引物的原因：DNA聚合酶不能 ，而只能从 延伸DNA链，因此DNA复制需要引物。 DNA RNA DNA母链 20～30 从头合成DNA 3′端 DNA的热变性 DNA两条模板链 脱氧核苷酸 耐高温的 缓冲溶液 自动 调控温度 3．PCR的反应过程 (1) ：温度上升到90 ℃以上时，双链DNA解旋为 　　　 单链 ? (2) ：温度下降到50 ℃左右，两种引物通过碱基互补 　　　 配对与两条单链DNA结合 ? (3) ：温度上升到72 ℃左右时，在 酶的作 　　　 用下，四种脱氧核苷酸通过碱基互补配对合 　　　 成新DNA链 变性 复性 延伸 DNA聚合 1．DNA复制时为什么需要引物？ 提示：DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，而只能从3′端延伸DNA链。 2．PCR扩增DNA过程中是否还需要解旋酶？ 提示：不需要。 3．利用PCR技术扩增1个DNA分子n次，所得DNA分子中，不含引物的脱氧核苷酸链所占的比例是多少？含引物的DNA分子所占的比例是多少？ 提示：1/2n；100%。 [跟随