实验四水中细菌学检查6-3要点.ppt

实验四、水中细菌学检查——水中细菌总数和大肠菌群的检测 1、无菌操作过程把握不好 2、实验效率与质量 3、注意实验细节 4、实验课上要善于思考 5、实验报告书写粗框（实验心得还有抄袭现象） 四、 试验操作步骤 初发酵实验原理 平板分离实验原理 五、试验结果及分析 六、思考题 * * * * * 一、细菌总数测定 二、大肠菌群的测定 实验中存在的问题 1ml 1ml 1ml 1ml 9毫升无菌水 1ml 1ml CK对照 湖水 10-1 10-2 10-3 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 自来水 1ml 1ml 水源水 10-1 10-2 1ml 1ml 9ml无菌水 10ml普通浓度乳糖蛋白胨发酵管 1ml 1ml 1ml 3倍浓缩乳糖蛋白胨 5ml 50ml 10ml 100ml 多管发酵法测定水中大肠菌群 1ml 1ml 1ml 1ml 9毫升无菌水 1ml CK对照 10-1 10-2 10-3 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 自来水 1ml 1ml 水中细菌学检测 1ml 湖水 1ml 1ml 1ml 3支10ml普通浓度乳糖蛋白胨发酵管 3倍浓缩乳糖蛋白胨 5ml 50ml 10ml 100ml 水样接种 初步发酵 产酸产气 大肠菌群 厌氧芽孢杆菌 好氧芽孢杆菌 大肠菌群 好氧芽孢杆菌 阳性管 大肠菌群 革兰氏阴性无芽孢 革兰氏染色 产生 典型菌落 鉴别培养基 平板分离 产酸产气 复发酵 水样采集 实验结果 多管发酵法测定水中大肠菌群 发酵管内装有乳糖蛋白胨液体培养基，并倒置杜氏小套管。乳糖能起选择作用，因为很多细菌不能发酵乳糖，而大肠菌群能发酵乳糖而产酸产气。为便于观察细菌的产酸情况，培养基内加有溴甲酚紫作为PH指示剂，细菌产酸后，培养基即由原来的紫色变为黄色。溴甲酚紫还有抑制其他细菌如芽孢菌生长的作用。 多管发酵法测定水中大肠菌群 平板培养基使用伊红美蓝琼脂（eosin methylene blue agar，EMB agar）。伊红美蓝琼脂平板含有伊红和美蓝染料，在此亦作为指示剂，大肠菌群发酵乳糖造成酸性环境时，该两种染料即结合成复合物，使大肠菌群产生带核心的、有金属光泽的深紫色（龙胆紫的紫色）阳性菌落。初发酵管24h内产酸产气和48h产酸产气的均需在以上平板上划线分离菌落。 多管发酵法测定水中大肠菌群 水源水 10-1 10-2 1ml 1ml 9ml无菌水 10ml普通浓度乳糖蛋白胨发酵管 1ml 1ml 1ml 3倍浓缩乳糖蛋白胨 5ml 50ml 10ml 100ml 多管发酵法测定水中大肠菌群 多管发酵法测定水中大肠菌群 平板划线分离，其划线方法有以下两种： 分段划线 连续划线 多管发酵法测定水中大肠菌群 0.01 0.1 1 10 100 发酵结果 水样管/ml 多管发酵法测定水中大肠菌群 ＞23800 + + + + 23800 — + + + 9600 + — + + 2300 — — + + 1800 + + — + 940 — + — + 920 + — — + 280 + + + — 230 — — — + 220 — + + — 190 + — + — 180 + + — — 95 — — + — 90 — + — — 90 + — — — ＜90 — — — — 接种水样总量为11.11（10，1，0.1，0.01mL各一份） 0.01 0.1 1 10 备注 每升水样中 大肠菌群数 接种水样量 中度污染水 ＞2380 + + + + 2380 — + + + 960 + — + + 230 — — + + 180 + + — + 94 — + — + 92 + — — + 28 + + + — 23 — — — + 22 — + + — 19 + — + — 18 + + — — 9.5 — — + — 9 — + — — 9 + — — — ＜9 — — — — 接种水样总量为111.11（100，10，1，0.1，0.01mL各一份） 0. 1 1 10 100 备注 每升水样中 大肠菌群数 接种水样量 我国《生活饮用水卫生标准》具体规定如下： 1 细菌总数1ml水中不超过100个。 2 大肠菌群数1 L 水中不超过3个。 3 若只经过加氯消毒即供作生活饮用水的水源水，大肠菌群数平均每升不得超过1000个；经过净化处理及加氯消毒后供作生活饮用水的水源水，大肠菌群数平均每升不得超过10000个。