MP Fastprep-CTAB土壤基因组抽提操作流程.docVIP

MP Fastprep-CTAB土壤基因组抽提操作流程 取陶瓷珠 0.5g ，土样 0.2-0.5g（一般0.3g最优）。 加入MP仪器的带盖研磨管中，并加入CTAB溶液 0.5 ml ，PCI溶液 0.5ml。 再用MP fastprep仪器进行操作，选用5.0 m/s 30 s 。 （注意；加PCI时要 取溶液的下层相，并且要戴手套在通风橱中操作） 然后取出研磨管顶速离心（13000rpm）5 min 。 移取上清到1.5ml离心管中，再加等体积的CI溶液，上下颠倒混匀。 （注意；加CI时，要戴手套在通风橱中操作） 顶速离心（13000rpm）5min 定量移取上清到1.5ml离心管中，再加2倍体积的无水乙醇和0.1倍体积的 3M的NaAc 溶液，上下颠倒混匀。置于-20℃中，5min 顶速离心（13000rpm）5min ，去掉上清 （注意不要倒掉了，最好用移液枪吸）加入少许（200ul差不多）75%乙醇清洗； 顶速离心（13000 rpm）5 min ，去掉上清（注意不要倒掉了，最好用移液枪 吸）烘干。 向离心管中定量（50 ul-200 ul）加入TE或是ddH2O 充分溶解。 然后用0.8% agar 电泳检测，Maker：? /Hind Ⅲ。 Appendix; 试剂配制； 1、CTAB （4℃ 低温避光保存 ） 4.095 g Nacl ；10 g ctab