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二、DNA的复制 DNA Replication   1）模板(template)：解开成单链的DNA母链 2）底物(substrate)或称原料：dATP、dGTP、dCTP、dTTP 3）引物(primer)：复制需要一小段RNA作引物 4）能源：需ATP供能，原料dNTP本身也是高能化合物 5）酶和蛋白质因子：DNA聚合酶(polymerase)等 需要 模板 起始:形成复制叉replication fork需解决两个问题 DNA解开成单链，提供模板 合成RNA引物，提供 3? -OH末端 延长: DNA-pol Ⅲ ( DDDP-Ⅲ )的5? → 3?的聚合活性使核苷酸之间生成3?，5?磷酸二酯键 模板 以DNA单链为模板 底物 dNTP（dATP、dGTP、dCTP、dTTP） 引物 以小片段RNA为引物，在 RNA引物的 3? -OH末端上开始逐个添加dNTP 按碱基配对原则 （A = T G ≡ C） 按5? → 3? 方向 复制子(replicon) 复制子的定义 不同生物复制子的数目 复制眼概念 复制叉概念及其移动方向的实验确定 复制的模式---起点、方向和速度 复制子的定义 DNA中发生一次复制的单位称为复制子(replicon)（一个DNA分子可能含多个复制子）。 复制子是根据它含有复制所需的控制元件来定义的，在复制的启动位点具有起始点（origin)，在复制的终止位点具有终点（terminus)。起始点仅作用于所在复制子。 注：在每个细胞周期中，每个复制子发生一次复制，且只发生一次。 质粒一般是一个自主环状的DNA基因组，构成一个独立复制子； 原核生物基因组中一般只含一个复制子，在唯一的起始点启动就会引起整个基因组复制； 真核生物基因组含多个复制子（一般40-100kb/个）。 复制眼概念 复制叉移动方向的确定 不同生物的复制子 DNA复制的几种形式 线性DNA双链的复制 环状DNA双链的复制 线性DNA双链的复制 线性DNA复制的具体表现 线性DNA复制时末端问题的提出 线性DNA复制时末端问题的解决方案 线性DNA复制的具体表现 3.1.2 线性DNA复制时末端问题的提出 3.1.3 线性DNA复制时末端问题的解决方案 (1）通过将线性复制子转变为环状或多聚分子。如T4和λ噬菌体：滚环产生多聚复制子）； (2）某种蛋白质可能会介入，在真正的末端上启动。几种线性病毒核酸具有与5`端碱基共价结合的蛋白质，其中了解最清楚的例子是腺病毒（adenovirus ）DNA，φ29噬菌体DNA和脊髓灰质炎病毒RNA)。 (3）DNA可形成特殊的结构，如在末端形成发夹。使分子没有游离末端。草履虫（Paramecium）的线性线粒体DNA的复制中就形成了一种交联； (4）末端是可变的，而不是精确确定的。真核生物染色体可能采用这种方式，在这种情况下，DNA末端的短重复序列的拷贝数改变（如端粒的复制）； （1）通过将线性复制子转变为环状或多聚分子 （2） 某种蛋白质介入而在真正的末端启动复制 （4） 末端长度可变 环状DNA的复制 θ-复制 replication by θ-structure φX174噬菌体由一个单链环状DNA组成，这条链称为正（+）链；合成的互补链称为负（一）链。双链体的复制以滚环复制方式进行。 DNA聚合酶 （1）DNA聚合酶 I 103 kDa的单链多肽，可以被蛋白酶切成两段，C端的2/3包括聚合酶活性位点；N端的1/3包含核酸外切酶校正活性（一次可切除1-10个碱基）。 （2） 利用DNA聚合酶 I 进行缺口平移法制备探针的基本原理 真核生物由不同DNA聚合酶分别负责起始和延伸 三种细胞核DNA复制酶具有不同的功能: DNA polymerase α 起始新链合成 DNA polymerase δ 延伸先导链 DNA polymerase ε 可能与后随链合成有关，也可能具有其他功能 DNA聚合酶所具有的共同结构 许多DNA聚合酶有一个由三个结构域组成的大裂隙，类似于手形。 真核生物DNA合成的特点 1、DNA合成发生的时间：仅为细胞周期的S期。 2、复制的起始点为多起点。 3、合成所需的RNA引物和冈崎片断都比原核生物的短。 4、控制前导链和后随链的聚合酶不同。 5、染色体端体的复制。 基因组复制与细胞分裂的关系 细胞在每次分裂的过程中，整个基因组都必须精确地复制一次。 如何保证这一点？两个原则 (1) DNA复制的启动决定了细胞的进一步分裂; (2) 复制过程完成前，细胞是不会发生分裂的。 小 结 复制子、