环介导的等温扩增法研讨.pptVIP

环介导的等温扩增法 聚合酶链武反应技术(PCR)自1985年问世来，以其灵敏性、特异性和快速性在医学和分子生物学等领域得到广泛的应用，由此可见核酸扩增技术的重要性。 PCR方法依据其灵敏度高、特异性好，成为目前最精准的基因诊断方法。 然而常规PCR技术存在如下缺陷： (1)需要昂贵的PCR仪； (2)多因素影响扩增效果； (3)常引起非特异性扩增； (4)扩增反应时间长，一般需要几个小时，难以在基层推广应用等诸多的缺陷，急需更新的方法来替代。 近年来随着分子生物学技术的发展，新的核酸扩增技术也不断涌现。根据是否需要温度循环也可分为两类：一类是非等温扩增体系，如聚合酶链式反应(PCR)、 连接酶链式反应(LCR)等。另一类是等温扩增体系，如赖解旋酶恒温基因扩增(HDA)、核酸依赖的扩增(NASBA)、滚环扩增(RCA)、环介导的等温扩增（LAMP）等系统，核酸恒温扩增技术的出现满足了上述要求。 1、赖解旋酶恒温基因扩增技术（HDA） HDA技术是依靠解旋酶解开双链DNA，结合蛋白(SSB)保持单链DNA状态，DNA聚合酶催化靶片段的扩增。反应温度依据使用的酶的不同而不同。 2、核酸依赖的扩增（NASBA) 1990年首次提出的由一对引物引导的连续均一的体外特异核苷酸序列等温扩增酶促过程。反应在42℃进行，扩增速度与PCR一样快，在3小时