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第三章 质谱技术 Mass spectrum－MS 内容： 第一节 质谱学基础 第二节 高效液相色谱－质谱 (HPLC-API MS) LC－MS联用所面临的两大问题 液相色谱流动相的量比质谱所能忍受的量大得多。典型流量是1mL/min,气化后相当于气体流速150－1200mL/min，而现代质谱只能忍受的气体流量只有1－20mL/min； 液相色谱的研究对象是难挥发和热不稳定的化合物，这些化合物用常规电离方法是很难电离的。 关于LC－MS的研究主要致力于解决上述两个问题。 LC/MS 电离技术的相对适用性 HPLC-ESIMS (电喷雾电离) 电喷雾电离源API-Electrospray Ion Source 电喷雾电离－离子形成的必要步骤 步骤 1－在溶液中如何产生离子？ 步骤 2－气动辅助电喷雾－产生带电液滴 步骤 3－带电液滴的去溶剂 液滴的Con’t库仑分裂 步骤 4－从溶液中解吸离子 步骤 5－气相中的离子反应 电喷雾喷雾室设置 电喷雾需考虑的问题 HPLC-APCI(大气压化学电离) APCI离子化机理 APCI离子化机理 APCI 离子源 APCI 喷雾室的设置 APCI 需考虑 小 结 HPLC－APIMS方法开发 质谱条件 - 离子源选择（1） ESI 待测物无需有挥发性 热不稳定成份首选 离子在溶液中已形成 形成单电荷离子和多电荷离子 流速 750μL/min APCI 待测物需有一定挥发性 待测物对热稳定 离子在气态中形成 只形成单电荷离子 流速 500μL/min 质谱条件 - 离子源选择（2） ESI 在溶液中已是离子态 catacholamines, sulfate conjugates, quaternary amines 含杂原子化和物 carbamates, benzodiazepines 带多电荷成份 proteins, peptides, oligonucleotides 对APCI响应弱的物质 APCI 中等分子量和中等极性成份 PAHs, PCBs, fatty acids, phthalates, alcohols, aldehydes, ketones，etc. 含杂原子化和物 carbamates, benzodiazepines 对ESI响应弱的物质 液相方法转为液质联用需要考虑： - 色谱分离和待测物离子化 待测物的离子化能力 流动相及流速与质谱的匹配性 色谱柱与质谱的匹配性 液相条件- 选择相应的色谱柱 液相条件- 色谱柱内径选择 ESI Flow rate: 1-1000μl/min 1.0, 2.1, 3.0mm id 建议用 2.1mm 浓度相关 反相流动相 APCI Flow rate: 50-1500μl/min 4.6, 3.0, 2.1mm id 建议用 4.6mm 浓度不相关，进样多，信号强 反相和正相流动相 液相条件- 色谱柱颗粒度选择 5μm Particles 扫描模式 wider peak width 简单样品 3.5μm or Particles SIM, 增加灵敏度 增加分辨率 缩短分析时间 复杂样品 等度组份 液相条件- 色谱柱长度选择 短柱（15-75mm) 缩短时间 SIM，Multiple ion mode 简单样品 易区别分子量 长柱（150 or 250mm) 提高分离效果 扫描模式 Multiple – ion mode 复杂样品 等度分离 液相条件 - 流速 ESI 浓度敏感 微径柱得到更高灵敏度 最佳工作流量：100 - 500 μl/min 柱后添加调节离子化效率 色谱未能分离的组份，可用萃取离子模式进行定量 APCI 质量流量敏感 柱内径对灵敏度的影响极小 最佳工作流量：500-1500μl/min 可用正相色谱 色谱未能分离的组份，可用萃取离子模式定量 液相条件 – 与API-MS匹配的溶剂 For ESI and APCI Methanol Ethanol Propanol Isopropanol Butanol Acetonitrile Water DMF DMSO Acetone CH2Cl2 CHCl3 For APCI only Toluene Benzene Hydrocarbons (e.g., Hexane) Styrene CCl4 CS2 Cyclic Hydrocarbons (e.g.,Cyclohexane) 液相条件 – 常用缓冲盐(挥发性) For ESI and APCI Acetic acid,pH 3.8-5.8 Ammonium acetate,pH 6-7 Ammonium for