环境工程微生物学实验摘要.ppt

环境工程微生物学实验 3.使用显微镜的注意事项 ??? （1）显微镜安放位置， 显微镜应安放在离桌边缘5 cm、镜筒向前，并讲清显微镜位置稍靠左侧的道理（两眼同时睁开观察，眼不易疲劳，便于绘图。） （2） 对光根据光线的强弱来选择平面镜或凹面镜；用低倍镜进行对光，把低倍镜位置放低；在转动转换器时，物镜到位，光圈调节好，视野光线均匀、明亮. 3.使用显微镜的注意事项 （3）正确使用高倍物镜的方法??? 由于高倍物镜的工作距离小，镜头易损坏，,并且把光圈开大。?（4）重视准焦螺旋的使用??? 在使用高倍物镜时，不要调节粗准焦螺旋，避免物镜损坏、装片压烂。?（5）不是倍数越大，越清晰??? 如果目镜倍数过大，得到的放大虚像则很不清晰。在低倍镜下能看清楚的物像，不必用高倍镜观察。? 洋葱鳞叶表皮细胞(10×10) 洋葱鳞叶表皮细胞(10×40) 洋葱鳞叶表皮细胞(10×40) 洋葱鳞叶表皮细胞装片（10 × 40） 细胞壁 实验二  培养基的配制和灭菌   实验目的 1.熟悉玻璃器皿的洗涤和灭菌前的准备。 2.掌握培养基和无菌水的制备方法。 3.掌握高压蒸气灭菌技术。 实验原理 培养基是用人工的办法将多种营养物质按微生物生长代谢的需要配制成的一种营养基质。培养基中均应含有满足微生物生长发育且比例合适的水分、碳源、氮源、无机盐、生长因素以及某些特需的微量元素外还应具有适宜的酸碱度〔pH值〕、缓冲能力、氧化还原电位和渗透压。 实验器材 (1)药品和试剂：牛肉膏、蛋白陈、NaCl、10％NaOH溶液、l0％盐酸溶液、琼脂、水 (2)器材：小烧杯、小铝锅、天平、牛角匙、1000mL刻度烧杯、玻棒、玻璃珠、pH试纸、试管、分装漏斗、棉花。高压蒸气灭菌锅、烘箱。 实验步骤 一、玻璃器皿的洗涤和包装 清洗并烘干玻璃器皿：如培养皿、移液管、试管等。 棉塞的制作 包装培养皿和移液管等。 二、培养基的配制 牛肉膏蛋白胨培养基的配制 （一）培养基配方： 牛肉膏2.5g 蛋白胨5.0g、NaCl2.5g、琼脂10.0g、自来水500mL、pH7.2~7.4。 （二）操作步骤： 1. 取一个1000mL烧杯，装500mL蒸馏水。 2. 按配方逐一正确称取各种成分，依次加入水中溶解。 注意：a. 前一种成分溶解之后，才能加入下一种成分 b. 蛋白胨、肉膏可加热促进溶解 c. 加热过程应不断搅拌，以免糊底烧焦，并适当补充因蒸发而损失的水量。 3. 调pH值：用10％ NaOH调pH至7.2~7.4，用精密pH试纸对照。 4.过滤 液体培养基可用滤纸过滤，固体培养基可用4层纱布趁热过滤，以利结果的观察。但是供一般使用的培养基，该步可省略。 5. 分装：将培养基分装于5支试管，其余全部倒入250mL锥形瓶中，分别塞上棉塞。分装时可用漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上面造成污染(见图2－3)。分装量：固体培养基约为试管高度的1／5，灭菌后制成斜面（图2－4）。分装入锥形瓶内以不超过其容积的3/5为宜。半固体培养基以试管高度的1/3为宜．灭菌后垂直待凝。注意不要污染棉塞和瓶口。 6. 包扎成捆，挂上标签，注明何种培养基。 7. 灭菌备用：灭菌条件：1210C（相当蒸汽压力0.103MPa）培养基灭菌后必须在37℃下恒温培养24h，确定无菌生长，方可使用。 图 例 三、稀释水的制备 1.取一个250mL的锥形瓶装90(或99)mL蒸馏水，放30颗玻璃珠(用于打破活性污泥、菌块或土壤颗粒)于锥形瓶内，塞棉塞、包扎，待灭菌。 2.另取5支18mm×180mm的试管，分别装9mL蒸馏水，塞棉塞、包扎，待灭菌。 无菌稀释水为微生物分离实验中所需要的材料。 四、灭菌 加热灭菌有干热灭菌和湿热灭菌。 干热灭菌法：电热烘箱作为干热灭菌器 干热灭菌的操作方法 a. 将待灭菌的物品放入恒温箱，将温度调节至160℃并维持2h； b. 把恒温箱的调节旋钮调回零处，待温度降到50℃左右，才能将物品取出。 湿热灭菌：高压蒸气灭菌法 高压蒸气灭菌法的操作步骤如下： 1. 灭菌锅内加入一定量的水。 2. 将待灭菌的物品放入锅内，并关严锅盖。 注意：器物不能装得太满。 3. 接通电源，进行加热。