登革病毒.docVIP

山东大学 设计(论文)题目： 登革病毒 姓 名 陈晓彤 学 院 生命科学学院 专 业 生命基地班 年 级 2006级 指导教师 陈敏 2010年5月18日 目 录 摘要……………………………………………………………………… 4 、绪论 …………………………………………………………………5 1.1 肠出血性致病菌E.coli O157:H7的研究概况…………………………5 1.1.1 肠出血性致病菌E.coli O157:H7的生物学特征…………………5 1.1.2 肠出血性致病菌E.coli O157:H7的流行概况……………………5 1.1.3 肠出血性致病菌E.coli O157:H7的流行特点……………………6 1.1.4 肠出血性致病菌E.coli O157:H7的致病性………………………6 1.1.5 E.coli O157:H7的检验……………………………………………7 1.2 Red重组系统简介………………………………………………………11 1.2.1 Red重组系统的定义及优点………………………………………11 1.2.2 Red重组系统的结构………………………………………………11 1.2.3 Red重组系统的作用机理…………………………………………12 第2章 实验部分………………………………………………………………14 2.1 实验材料…………………………………………………………………14 2.1.1 菌株及质粒…………………………………………………………14 2.1.2 培养基与缓冲液……………………………………………………14 2.1.3 引物………………………………………………………………15 2.1.4 主要仪器…………………………………………………………15 2.2 实验方法……………………………………………………………16 2.2.1 PCR扩增含有waaL基因同源臂的kan基因……………………16 2.2.2 PCR片段的DpnI酶切处理………………………………………16 2.2.3 胶回收DpnI酶切后PCR片段……………………………………16 2.2.4 pKD46转化E. coli O157:H7 …………………………………16 2.2.4.1 E. coli O157:H7化学感受态细胞制备……………………16 2.2.4.2 pKD46转化E. coli O157:H7感受态细胞。…………………17 2.2.4.3 E.coli O157:H7/pKD46阳性转化子（记为H71）的筛选——粗提质粒法…………………………………………………………………………17 2.2.5 H71电转感受态细胞的制备………………………………………17 2.2.6 电转外源DNA片段………………………………………………18 2.2.7 重组子的筛选与验证……………………………………………18 2.2.8 Kan抗性的消除…………………………………………………18 2.3 实验结果………………………………………………………………19 2.3.1 重组子E.coli O157:H7/pKD46即H72的验证…………………19 2.3.2 O157:H7重组子（即H75）的筛选与验证……………………20 结论…………………………………………………………………21 致谢………………………………………………………………………………22 参考文献………………………………………………………………………23 附录……………………………………………………………………………24 摘要: 登革热病毒是小型黄病毒，属于黄热病毒属，能引起登革热急性传染病，通常由在白天叮咬人的埃及伊蚊和白纹伊蚊传播，登革热病毒能够引起一系列临床症状，包括有生命危险的失血性休克综合征和较少见的伴有肝衰与脑病的急性肝炎。感染登革热病毒轻则突然发热、剧烈肌肉疼痛、骨关节痛，重则广泛出血、迅速休克。登革病毒（Dengue virus, DEN）是登革热、登革出血热/登革休克综合征（DHF/DSS）的病原体，以埃及伊蚊和白纹伊蚊为传播媒介，广泛流行于全球热带及亚热带的60多个国家和地区，每年超过一亿人受感染，25亿以上的人受到威胁登革热病毒为大小约50nm的有包膜病毒。在4冰箱中可保存数