微生物工程-教案07.docVIP

授课题目 灭菌技术 授课类型 理论 首次授课时间 2011 年 10 月 19 日 学时 2 教学目标 1．了解灭菌的方式方法，区别几种灭菌方式的相同点和不同点； 2．了解实验室培养基灭菌及工业灭菌的特点及操作方法； 3．了解空气灭菌的基本方法，掌握典型的空气除菌流程。 重点与难点 微生物的热死规律 教学手段与方法 教学模式：启发讲解与学生讨论相结合。 教学手段：板书。 教学过程：（包括授课思路、过程设计、讲解要点及各部分内容时间分配授课过程： sterilization 为什么要灭菌？（杂菌污染的后果） 营养基质或产物被消耗损失； ； 杂菌繁殖导致改变，造成生物反应异常 第一节 灭菌原理与方法 灭菌（sterilization）是指利用物理或化学方法杀灭或去除物料或设备中的灭菌方法 一、化学物质灭菌 通过改变微生物细胞膜的渗透性，或者损伤细胞膜，影响微生物细胞的正常代谢。 不适合于培养基的灭菌，只适合于局部空间或某些器械的消毒。 （一）无机酸、碱及盐类 酸碱的杀菌能力主要由其电离度而定，电离出得氢离子或氢氧根离子浓度越高，杀菌力越强。 盐溶液的杀菌力与其浓度成正比。（腌咸菜可以保藏很长时间而不染菌） （二）重金属盐 杀菌原理是重金属盐使细胞中蛋白质失活。比如升汞。服食牛奶、鸡蛋等高蛋白含量食物可解毒。 （三）氧化剂 高锰酸钾 （四）有机化合物 乙醇：脱水、使蛋白质变性和沉淀，70~75%最有效。 二、辐射灭菌 紫外线：诱导胸腺嘧啶二聚体的形成，从而抑制了DNA的复制；空气在紫外线照射下产生臭氧，臭氧也具有一定的杀菌作用。 X射线、γ射线：能量极高，被菌体吸收后，菌体内的水和有机物产生强烈的离子化反应，形成OH-、过氧化氢和有机过氧化物，这些过氧化物阻碍微生物的代谢活动而导致菌体迅速死亡。 三、过滤介质除菌 工业上利用过滤的方法制备大量的无菌空气，供好氧微生物的深层培养使用。 四、干热灭菌 火焰灼烧法 干热空气灭菌法：140~160℃维持2~3h。 五、湿热灭菌 湿热灭菌条件为121℃维持20~30min。 巴氏杀菌（Pasteurization）低温消毒法，主要应用于生产酸奶乳制品。目前国际上通用的巴氏高温消毒法主要有两种：一种是将牛奶加热到62~65，保持30分钟。采用这一方法，可杀死牛奶中各种生长型致病菌，灭菌效率可达97.3%~99.9%，经消毒后残留的只是部分嗜热菌及耐热性菌以及芽孢等，但这些细菌多数是乳酸菌，乳酸菌不但对人无害反而有益健康。 第二种方法将牛奶加热到75~90，保温15~16秒，其杀菌时间更短，工作效率更高。但杀菌的基本原则是，能将病原菌杀死即可，温度太高反而会有较多的营养损失。 二、微生物的 对微生物进行湿热灭菌时，死亡速率可视为一级反应，即与残存的微生物数量成正比 -dN/dt kN 积分得 lnN/N0 -kt 或 N N0exp -kt 式中 N——存在的活菌数； N0——当t 0时，培养基中的活菌数； t——时间，s； k——速率常数或死亡比速率，s-1。死亡比速率k的绝对值反映了微生物耐热性的强弱，k越大，表明微生物越易死亡。培养基营养成分受热破坏也可看做一级反应，即 式中 c——对热不稳定物质的浓度，mol/L； kd——分解速率常数，s-1。 温度升高时，微生物死亡速率的增加，比营养成分的分解速率的增加大得多。因此，在较高温度下可以通过缩短灭菌时间而减少营养成分的损失，这是高温瞬时灭菌法（HTST）的理论基础。 又称实罐灭菌或，是将配制好的培养基。 投资少，设备简单，灭菌效果可靠；但加热和冷却时间长，培养基养分受到破坏。 一般蒸汽压力在Pa；是中小型发酵罐常用的灭菌方法。 （二）培养基连续灭菌 加热、保温、冷却3个阶段分别在不同的专有设备中进行。 灭菌温度比分批灭菌更高，灭菌时间缩短，营养物质破坏减少；但设备比较复杂，投资较大。 蒸汽压力一般高于Pa 第三节 空气除菌 干热杀菌、、静电、过滤等 一、发酵对空气质量的要求 1.空气中的微生物 空气中的微生物多为细菌、孢子，也有霉菌、酵母和病毒，大小从几微米到几十微米不等。 空气中微生物数目的数量级一般为103~104个/m3，每提高2.5m，空气中的微粒数可减少一个数量级。 一般情况下悬浮在空气中的微生物大多是能耐恶劣环境的孢子或芽孢，繁殖需要较长的调整期，但在阴雨天气或环境污染严重时，空气中也会悬浮大量的活力较强的微生物，在培养条件良好时，只要很短的调整时间，即可进入对数生长期而大量繁殖，这也是为什么阴天下雨时容易发霉的原因。 2.发酵对空气无菌程度的要求 一般控制染菌概率为10-3，即1000次发酵周期所用的无菌空气只允许1次染菌。 通常细菌繁殖一代只需20~30min，如果进入一个细菌，繁殖15h后